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神經(jīng)元細(xì)胞收貨后處理步驟

發(fā)布時(shí)間：2020/9/25 14:00:20 閱讀次數(shù)：714

神經(jīng)元細(xì)胞屬于終末分化細(xì)胞，細(xì)胞本身體外不增殖；但是在合適培養(yǎng)條件下，神經(jīng)元突觸會(huì)再生長(zhǎng)。

神經(jīng)元細(xì)胞本身貼壁不牢，易脫落，細(xì)胞貼壁需用PLL（多聚賴氨酸）包被處理培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)器皿。

由于細(xì)胞貼壁不牢，運(yùn)輸會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞收縮、脫落、聚團(tuán)等狀況。

1、細(xì)胞收縮：收貨后觀察狀態(tài)，收縮未脫落，更換培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，3天換液一次，等5-7天可見細(xì)胞突觸生長(zhǎng)，（注：細(xì)胞培養(yǎng)液必須37℃預(yù)熱，冷培養(yǎng)液會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞收縮脫落）。

2、脫落、聚團(tuán)：收集細(xì)胞，離心得細(xì)胞沉淀，沉淀經(jīng)0.25%胰酶消化2-3min后，終止消化，PBS離心洗滌，重新接種，接種時(shí)使用包被過器皿，最好直接接種于實(shí)驗(yàn)器皿，貼壁之后正常換液培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)（如果細(xì)胞不貼壁，可適當(dāng)添加5%FBS，促進(jìn)貼壁，持續(xù)加血清培養(yǎng)，會(huì)增加雜細(xì)胞），請(qǐng)避免再次消化。

3、注：胰酶消化會(huì)損傷細(xì)胞，請(qǐng)避免多次消化；暴力機(jī)械吹打會(huì)損失細(xì)胞，請(qǐng)輕柔操作；神經(jīng)元本身不增殖，長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)部分雜細(xì)胞會(huì)增殖變多，此類雜細(xì)胞本身更利于支撐神經(jīng)元細(xì)胞生長(zhǎng)，如果刻意在乎細(xì)胞純度，請(qǐng)勿長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)。