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雞新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗原陽(yáng)性血清與陰性血清說(shuō)明書(shū)

發(fā)布時(shí)間：2020/12/10 9:18:03      閱讀次數(shù)：1341

 

雞新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗原陽(yáng)性血清與陰性血清說(shuō)明書(shū)

獸用非處方藥

【獸藥名稱(chēng)】

通用名稱(chēng)：雞新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗原、陽(yáng)性血清與陰性血清

英文名稱(chēng)：Newcastle Disease Hemagglutination Inhibition Test Antigen，Positive Sera and Negative Sera

漢語(yǔ)拼音：Ji Xinchengyi Xueningyizhishiyan Kangyuan，Yangxingxueqing Yu Yinxingxueqing

【主要成分與含量】

抗原含有滅活的雞新城疫病毒，血凝效價(jià)應(yīng)≥1:512。陽(yáng)性血清為雞新城疫高免的SPF雞血清，HI效價(jià)應(yīng)≥1:512。陰性血清為SPF雞血清。

【性狀】

抗原為微黃色海綿狀疏松團(tuán)塊，易與瓶壁脫離，加稀釋液后迅速溶解；陽(yáng)性血清和陰性血清均為微黃色海綿狀疏松團(tuán)塊，易與瓶壁脫離，加稀釋液后迅速溶解。

【作用與用途】用于血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)雞新城疫抗體。

【用法與判定】

1  血凝（HA）試驗(yàn)操作方法

1.1 在V型微量反應(yīng)板中，每孔加0.025ml PBS溶液。

1.2 第1孔加入0.025ml抗原，依次作0.025ml的對(duì)倍稀釋至第11孔；為精確計(jì)算血凝單位，病毒懸液開(kāi)始需作一系列密集稀釋?zhuān)?/font>1/3、1/4、1/5、1/6等。

1.3 每孔加0.025ml PBS溶液。

1.4 每孔加0.025ml 1%（V/V）雞紅細(xì)胞懸液。

1.5 將反應(yīng)板在振蕩器上振蕩1~2分鐘或輕叩反應(yīng)板混合反應(yīng)物，室溫（20~25℃）靜置15~30分鐘或2~8℃ 45~60分鐘，當(dāng)對(duì)照孔的紅細(xì)胞顯著呈紐扣狀時(shí)判定結(jié)果。

1.6 結(jié)果判定  將反應(yīng)板傾斜60°，觀察紅細(xì)胞有無(wú)呈淚珠樣流淌，完全無(wú)淚珠樣流淌（100%凝集）的最高稀釋倍數(shù)為血凝效價(jià)。表示1個(gè)HA單位（HAU），再根據(jù)開(kāi)始的稀釋倍數(shù)精確計(jì)算血凝效價(jià)。

2  血凝抑制（HI）試驗(yàn)操作方法

2.1 根據(jù)HA測(cè)定的效價(jià)，計(jì)算配制4個(gè)血凝單位（4HAU）抗原。

2.2 反應(yīng)板中每孔加入0.025ml PBS。

2.3 第1孔中加入0.025ml血清。

2.4 在反應(yīng)板上將血清做橫向0.025ml的對(duì)倍稀釋?zhuān)恋?/font>10孔。

2.5 在第1孔至第11孔中，每孔加入0.025ml的4HAU抗原，室溫下（20~25℃）靜置30分鐘或2~8℃ 45~60分鐘。

2.6 每孔加入0.025ml 1%（V/V）的雞紅細(xì)胞懸液，輕晃混勻后，室溫（20~25℃）靜置20~40分鐘或2~8℃ 45~60分鐘，當(dāng)對(duì)照孔紅細(xì)胞呈顯著紐扣狀時(shí)判定結(jié)果。

2.7 結(jié)果判定  以完全抑制4HAU抗原的最高血清稀釋倍數(shù)判為該血清的HI效價(jià)。當(dāng)陽(yáng)性血清的HI效價(jià)與已知效價(jià)誤差不超過(guò)1個(gè)滴度，陰性血清效價(jià)不高于1:4時(shí)，試驗(yàn)方可成立。被檢樣品HI效價(jià)≤1:4判為陰性；等于1:8判為可疑（可疑樣品應(yīng)重檢，重檢效價(jià)≥1:8判為陽(yáng)性，＜1:8判為陰性）；≥1:16判為陽(yáng)性。

【注意事項(xiàng)】

（1）HA和HI試驗(yàn)影響因素甚多，應(yīng)嚴(yán)格控制試驗(yàn)條件，準(zhǔn)確控制紅細(xì)胞懸液和抗原工作濃度，同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制溫度和作用時(shí)間。

（2）用pH值7.0~7.2的PBS作稀釋液。

（3）抗原和陰、陽(yáng)性血清若有污染，應(yīng)廢棄。

（4）使用時(shí)應(yīng)先測(cè)抗原的血凝價(jià)，根據(jù)所測(cè)結(jié)果，配制4個(gè)血凝單位的抗原，配好后的抗原應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)用完。

（5）抗原開(kāi)封后2~8℃保存，應(yīng)不超過(guò)3個(gè)月。切忌反復(fù)凍融。

【貯藏與有效期】  2~8℃保存，抗原、陽(yáng)性血清和陰性血清有效期均為24個(gè)月。


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