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染色質(zhì)免疫沉淀分析

發(fā)布時間：2021/5/10 8:49:23 閱讀次數(shù)：423

染色質(zhì)免疫沉淀分析
（Chromatin Immunoprecipitation Assay, ChiP）

真核生物細胞狀態(tài)是由內(nèi)源和外源因素共同影響的，所有信號傳遞途徑的終點都是DNA。DNA通過核蛋白復合物組成染色質(zhì)，染色質(zhì)基因調(diào)控的一個重要作用位點。轉(zhuǎn)錄激活因子和輔助抑制因子的研究顯示存在一種新的調(diào)節(jié)機制 “組蛋白密碼”，其信息存在于組蛋白的轉(zhuǎn)錄后修飾等過程中。該類修飾包括組蛋白磷酸化、乙酰化、甲基化、ADP-核糖基化等過程。隨著越來越多組蛋白核心結(jié)構(gòu)區(qū)域和羧端修飾的確定，組蛋白密碼在控制和調(diào)節(jié)基因功能過程中的作用越來越明確。
參與修飾的酶根據(jù)其作用的不同而分類：如組氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶（HATs）可以將乙�；鶊F轉(zhuǎn)到組蛋白上；組蛋白去乙酰酶（HDACs）可以去除氨基酸上的乙�；鶊F；組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶（HMTs）可以將甲基基團轉(zhuǎn)移到組蛋白上等。不同組氨酸修飾標記對應于不同的生物學過程，它可以作為調(diào)節(jié)因子的作用位點，也可以用來改變?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu)。

凝膠電泳遷移率改變分析（EMSA）是目前研究轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白和相應核苷酸序列結(jié)合的常用方法，但是由于許多轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白有相似或相同的DNA結(jié)合位點，這種體外分析獲取的結(jié)果不一定能真實地反映體內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白和DNA結(jié)合狀況。
染色質(zhì)免疫沉淀分析（ChiP）是基于體內(nèi)分析發(fā)展起來的方法，它能真實、完整地反映結(jié)合在DNA序列上的調(diào)控蛋白。它是目前確定與特定蛋白結(jié)合的基因組區(qū)域或確定與特定基因組區(qū)域結(jié)合的蛋白質(zhì)的最好方法。
ChiP技術(shù)和芯片技術(shù)的結(jié)合有利于確定全基因組范圍內(nèi)染色體蛋白的分布模式以及組蛋白修飾情況。

甲醛處理使蛋白質(zhì)與DNA交聯(lián)；
超聲波將染色質(zhì)打斷成一定大小；
通過抗體沉淀蛋白質(zhì)－DNA交聯(lián)復合體；
解除交聯(lián)，純化DNA；
實時定量PCR檢測DNA的量

應用：
組蛋白修飾酶的抗體作為“生物標記”
轉(zhuǎn)錄調(diào)控分析
藥物開發(fā)研究
有絲分裂研究
DNA損失與凋亡分析

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