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如何將H9c2（2-1）養(yǎng)得更好？

發(fā)布時(shí)間：2022/3/10 13:36:09 閱讀次數(shù)：635

H9c2（2-1）（大鼠心肌細(xì)胞）是由胚胎BD1X大鼠心臟組織衍生的原始克隆細(xì)胞系的亞克隆，并表現(xiàn)出骨骼肌的許多特性。該細(xì)胞中的成肌細(xì)胞能融合形成多核的肌管，并對(duì)乙酰膽堿的刺激發(fā)生反應(yīng)。如果培養(yǎng)基中的血清濃度下降到1%，H9c2(2-1)細(xì)胞融合會(huì)發(fā)生得很快。該細(xì)胞系是檢測(cè)細(xì)胞發(fā)育的有效模型系統(tǒng)^[1]。

本期為大家總結(jié)了，在培養(yǎng)H9c2（2-1）細(xì)胞過(guò)程中，特別需要注意的地方。

如果還有疑惑，記得文末留言，在線互動(dòng)。

細(xì)胞復(fù)蘇

溶解細(xì)胞過(guò)程要迅速；已溶解的凍存細(xì)胞不能在常溫下存放太久，需要盡快離心去除DMSO。

細(xì)胞凍存

推薦配比：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO的凍存液；

細(xì)胞凍存時(shí)，盡量吹散細(xì)胞，注意控制吹打力度。

細(xì)胞培養(yǎng)

H9c2（2-1）細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，正常細(xì)胞形態(tài)為梭形。

圖1. H9c2（2-1）細(xì)胞正常形態(tài)

培養(yǎng)條件

❖

培養(yǎng)基：DMEM＋10% FBS＋1% P/S

❖

推薦傳代比例：1:2-1:4

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推薦換液頻率：2~3次/周

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培養(yǎng)箱：37℃，5% CO₂

傳代操作

❖

去掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，加入PBS進(jìn)行沖洗，并去上清;

❖

加入0.25%胰酶進(jìn)行潤(rùn)洗，并去上清;

❖

放入CO₂培養(yǎng)箱消化2-4min;

❖

加入完全培養(yǎng)基終止消化，并吹打均勻。

常見問(wèn)題及解答

為什么會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞表面顆粒較多的現(xiàn)象？

可能是培養(yǎng)環(huán)境有問(wèn)題，可以改用DMEM/F-12培養(yǎng)基培養(yǎng)，傳三代后會(huì)恢復(fù)平整細(xì)胞表面。

為什么會(huì)出現(xiàn)空泡？

可能是鋪板時(shí)鋪得不夠均勻，局部過(guò)于密集，密集地方的細(xì)胞就開始狀態(tài)變差、空泡增多。也可能是血清差，需要更換優(yōu)質(zhì)血清，及時(shí)換液。

為什么細(xì)胞長(zhǎng)得慢？

可能是細(xì)胞接種得太少，細(xì)胞密度太低�？梢韵扰囵B(yǎng)，然后消化重新鋪瓶，提高密度培養(yǎng)。

為什么細(xì)胞狀態(tài)變差，容易漂？

可能是血清問(wèn)題，建議換血清，并注意血清要程序解凍，不能水浴化開；也有可能是細(xì)胞生長(zhǎng)密集，需要及時(shí)傳代，并不是細(xì)胞長(zhǎng)滿才傳代，當(dāng)有個(gè)別地方長(zhǎng)得過(guò)于密集，容易疊加的時(shí)候應(yīng)該就要傳代了。

注意

❖

在培養(yǎng)過(guò)程中，保持細(xì)胞匯合度30％～90％；

❖

每一步操作都要輕柔小心，以免細(xì)胞受損；

❖

選用優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基，減少有害物質(zhì)對(duì)細(xì)胞的刺激。

參考文獻(xiàn)

[1] Kimes BW,Brandt BL.Properties of a clonal muscle cell line from rat heart.Exp Cell Res.1976 Mar 15;98(2):367-81.