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發(fā)布時間:2022/8/8 12:15:30 閱讀次數(shù):516
注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
貨號:YX-C-SNAG
規(guī)格:50T/24S
產(chǎn)品內容:
試劑一:液體40mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入3mL 丙酮溶解,用不完的試劑仍-20℃保存; 試劑三:液體60mL×1瓶,4℃保存;
標準品:液體1mL×1支,5 mmol/L的對硝基苯酚溶液,4℃保存。臨用前用試劑一將標準品稀釋50倍得100µmol/L 的標準溶液。
產(chǎn)品說明:
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(S-NAG)是土壤微生物分泌的溶酶體中的一種酸性水解酶。其活性變化與機體某些病理狀態(tài)密切相關。
S-NAG分解對硝基苯β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算NAG活性。
自備實驗用品及儀器:
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、30-50目篩(或更。┖驼麴s水。
操作步驟:
一、樣本處理:
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干,過30-50目篩。二、測定步驟:
1. 分光光度計預熱30min,波長調至400nm,蒸餾水調零。
2. 加樣表:
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 標準管 | 空白管 |
風干土樣(g) | 0.1 | 0.1 | - | - |
試劑一(µL) | 550 | 550 | - | - |
試劑二(µL) | 50 | - | - | - |
混勻, 37℃水浴1h 后,立即沸水浴5min(蓋緊, 防止水分散失),流水/冰浴冷卻。 | - | - | ||
試劑二(µL) | - | 50 | - | - |
12000g 25℃離心10min,取上清液 | - | - | ||
上清液(µL) | 500 | 500 | - | - |
標準品(µL) | - | - | 500 | - |
蒸餾水(µL) | - | - |
| 500 |
試劑三(µL) | 1000 | 1000 | 1000 | 1000 |
室溫靜置2min 后,10000g 常溫離心5min,取上清測定400nm處的吸光值A。分別記為A測定管、A對照管、A標準管、A空白管。計算∆A=A 測定管-A 對照管,∆A標準=A標準管-A空白管。每個測定管設一個對照管。 |
三、S-NAG 活力計算:
單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1 µmol 對硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
S-NAG活力(U/g 土樣)=∆A÷ (∆A標準÷C標準)×V 反總÷W÷T =1.44× ∆A÷ ∆A標準÷W。
T:反應時間,1h=1/24d;V 反總:反應體系總體積:6×10-4 L;C標準:標準溶液濃度,100µmol/L; W:樣本質量,g。
注意事項:
當∆A 大于 1 時,建議將上清液稀釋后進行測定;當∆A 小于 0.02 時,建議延長反應時間。計算公式中注意乘以稀釋倍數(shù)或注意反應時間變化。
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