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發(fā)布時間:2024/9/4 9:07:50 閱讀次數(shù):79
T2毒素檢測試劑盒說明書
(酶聯(lián)免疫法)
1 原理及用途
T2毒素(T2)是由多種鐮刀菌產(chǎn)生的一種霉菌毒素。主要污染小麥、大麥、玉米等糧食作物及其制品,對人類健康及畜牧業(yè)構(gòu)成了較大危害。T2毒素主要影響血液,肝臟,腎臟,胰腺肌肉及淋巴細(xì)胞的功能,T2毒素中毒后的一般臨床癥狀為厭食、嘔吐、腹瀉、生長停滯、繁殖和神經(jīng)機(jī)能障礙等。使用T2毒素試劑盒則能夠快速而準(zhǔn)確的分析樣本中T2毒素殘留。
本試劑盒采用一步競爭ELISA方法檢測谷物、豆類、花生、飼料等樣本中的T2毒素,試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時,酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被T2毒素抗原與樣本中T2毒素競爭抗T2毒素抗體(抗體工作液),同時抗T2毒素抗體與酶標(biāo)二抗(酶標(biāo)記物)相結(jié)合,經(jīng)TMB底物顯色,樣本吸光值與其含有的T2毒素成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出樣本中T2毒素的含量。
2 技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度:0.1ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式:25℃,30min~15min
2.3 檢測下限:
谷物、豆類、花生、飼料等……………12ppb
2.4 交叉反應(yīng)率:
T2毒素……………………………………100%
2.5 樣本回收率:
谷物、豆類、花生、飼料等……………110±15%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96孔
標(biāo)準(zhǔn)液(黑蓋):各1ml
0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
酶標(biāo)記物(紅蓋)……………………5.5ml
抗體工作液(藍(lán)蓋)…………………5.5ml
底物液A(白蓋)……………………6ml
底物液B(黑蓋)……………………6ml
終止液(黃蓋)………………………6ml
20×濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
說明書…………………………………1份
蓋板膜…………………………………1張
自封袋…………………………………1個
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱、天平(感量0.01g)
4.2 微量移液器:單道20µl-200µl、100µl-1000µl,多道300µl
4.3 試劑:甲醇
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知:
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.2 配液:
配液1:樣本提取液
用去離子水將甲醇按3∶2體積比進(jìn)行稀釋(例:30ml甲醇+20ml去離子水)。
配液2:工作洗滌液
將20×濃縮洗滌液20倍稀釋(1份20×濃縮洗滌液加19份去離子水)。
5.3.1谷物、豆類、花生、飼料等樣本處理方法
1)稱取1g±0.05g粉碎樣本,加入20ml樣本提取液(配液1);
2)劇烈振蕩5min;
3)室溫4000r/min離心5min;
4)取上清液,用蒸餾水或去離子水按1∶5(即:取1份上清液+5份去離子水)比例稀釋;
5)取50µl進(jìn)行分析。
稀釋倍數(shù):120 檢測下限:12ppb
6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
6.1 編 號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)30min。
6.3 洗 滌:小心揭開蓋板膜,甩去孔內(nèi)液體,每孔加350µl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干(用吸水紙拍干,拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
6.4 顯 色:每孔加入底物液A 50µl,再加底物液B 50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15min(若藍(lán)色過淺,可適當(dāng)延長反應(yīng)時間)。
6.5 終 止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
6.6 測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10min內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光度值(%)= | A | ×100% |
A0 |
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來電索取)
8 注意事項(xiàng)
8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
8.3 混合要均勻,洗板要徹底,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性。
8.4 在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位(A450nm< 0.5 )時,表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。
T2毒素檢測試劑盒說明書
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