1.血清解凍
建議將血清從冰箱先移至2-8℃冰箱解凍,不宜在較高溫度下進(jìn)行解凍,解凍溫度較高會(huì)導(dǎo)致血清渾濁、沉淀增加、品質(zhì)下降等問(wèn)題。解凍過(guò)程中需要輕輕搖晃混合,嚴(yán)禁將血清直接放在37℃長(zhǎng)時(shí)時(shí)間孵育解凍。
如您是儲(chǔ)存在-80℃的血清,需提前幾天轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱中(至少24小時(shí)),使用前轉(zhuǎn)移至4℃冰箱中緩慢融化,融化過(guò)程中需不定期多次緩慢輕柔搖動(dòng)瓶身使血清混勻,搖晃過(guò)程中避免劇烈搖晃產(chǎn)生泡沫。
2.血清濃度
原則上血清添加量不要太多,通常分為5%、10%、20%幾檔,部分細(xì)胞原代提取時(shí)會(huì)使用20%血清,大部分細(xì)胞正常培養(yǎng)時(shí)會(huì)使用10%的血清濃度。至于某一株細(xì)胞適應(yīng)什么樣的血清濃度,還需要根據(jù)細(xì)胞特性、實(shí)驗(yàn)?zāi)康淖鰷y(cè)試和調(diào)校。
3.血清熱滅活
血清熱滅活是為了去除補(bǔ)體,補(bǔ)體是免疫系統(tǒng)的一部分,在體內(nèi)可通過(guò)多條途徑被激活,從而發(fā)揮調(diào)理吞噬裂解細(xì)胞、介導(dǎo)炎癥、免疫調(diào)節(jié)和清除免疫復(fù)合物等多種作用。如果不涉及以上實(shí)驗(yàn),可以不進(jìn)行血清熱滅活。
4.血清試用:
血清開始進(jìn)行試用時(shí),如果是重新復(fù)蘇細(xì)胞,建議用原培養(yǎng)體系進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇,待細(xì)胞狀態(tài)進(jìn)入最優(yōu)狀態(tài)后再進(jìn)行測(cè)試。測(cè)試時(shí)不建議直接100%直接換成新血清體系進(jìn)行培養(yǎng),而應(yīng)該按照比例進(jìn)行梯度替換(例如,首次換液按照新舊體系1:3,第二次換液1:1,第三次換液3:1,而后完全替換。對(duì)于一些對(duì)培養(yǎng)體系比較敏感的細(xì)胞,可以進(jìn)一步優(yōu)化替換比例。)通過(guò)這種方法可以避免細(xì)胞因環(huán)境改變而出現(xiàn)應(yīng)激或者異常造成不必要的損失。
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適用于培養(yǎng)各種正常組織細(xì)胞系、免疫細(xì)胞、白血病細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等。
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適用于培養(yǎng)原代細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞、心肌細(xì)胞等嬌貴難養(yǎng)的細(xì)胞。