發(fā)布時(shí)間：2023/4/24 10:38:55 閱讀次數(shù)：507
試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷
人冠狀病毒抗體（Coronaviruses-Ab）
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）.往預(yù)先包被人冠狀病毒抗原的包被微孔中,依次加入標(biāo)本 HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌.用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色.用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值）,與CUT OFF值相比較,從而判定標(biāo)本中冠狀病毒抗體（Coronaviruses-Ab）的存在與否.
樣品收集 處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離.
2. 血漿：EDTA 檸檬酸鹽或肝素抗凝.3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清.
3. 細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物.
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎.3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清.
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍.
自備物品
1. 酶標(biāo)儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL 2-20uL 20-200uL 200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項(xiàng)
1. 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘.從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用.
2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封（低溫干燥）保存.
3. 預(yù)處理后的樣本無需稀釋,直接取50μL加樣即可.
4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間 加液量及順序進(jìn)行溫育操作.
5. 所有液體組分使用前充分搖勻.
試劑盒組成
| 名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
| 微孔酶標(biāo)板 | 12孔×8條 | 12孔×4條 | 無 |
| 陰性對照 | 0.5mL | 0.5mL | 無 |
| 陽性對照 | 0.5mL | 0.5mL | 無 |
| 樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
| 檢測抗原-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
| 20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進(jìn)行稀釋 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 無 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 無 |
| 終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
| 封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
| 說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
| 自封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) | 無 |
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水.
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次.
2. 自動洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次.
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃.
2. 設(shè)置陰 陽性對照孔和樣本孔,陰 陽性對照孔中加入陰性對照 陽性對照各50μL；
3. 待測樣本孔加待測樣本10μL,樣本稀釋液40μL；
4. 隨后陰 陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗原100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min.
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）.
6. 每孔加入底物A B各50μL,37℃避光孵育15min.
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值.
結(jié)果判斷
1. 試驗(yàn)有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；
陰性對照孔OD值平均值≤0.15.
2. 臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
3. 陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off）,樣品為陰性
4. 陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off）,樣品為陽性
試劑盒性能
1. 準(zhǔn)確性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；陰性對照孔OD值平均值≤0.15,說明試驗(yàn)結(jié)果有效.
2. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng).
3. 重復(fù)性：板內(nèi) 板間變異系數(shù)均小于15%.
4. 貯藏：2-8℃,避光防潮保存.
5. 有效期：6個(gè)月
免責(zé)聲明
1. 試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn),否則所產(chǎn)生的一切后果,由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),本公司概不負(fù)責(zé).
2. 嚴(yán)格按照說明書操作,實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作,后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān).
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