當(dāng)前位置：首頁>商城動態(tài)
發(fā)布時間：2024/11/19 9:21:14 閱讀次數(shù)：20
| 傳代方法 | 第一次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 細(xì)胞庫無血清凍存液 |
| 細(xì)胞描述 | 組織來源:卵巢 疾病:卵巢囊腺癌 年齡:75 歲 培養(yǎng)體系:該細(xì)胞系培養(yǎng)所用基本培養(yǎng)基為 Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM), 配置完全培養(yǎng)基時需加入 10%FBS,10ug/ml Insulin,1% Anti-Anti庫的細(xì)胞僅用于科研工作,未經(jīng)許可不得用于其他目的,使用者不得將本庫細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者. | ||
| 培養(yǎng)備注 | 該細(xì)胞系培養(yǎng)所用基本培養(yǎng)基為高糖DMEM, 配置完全培養(yǎng)基時需加入 10%FBS,10ug/ml Insulin,1% Anti-Anti | ||
細(xì)胞收到后處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運輸?shù)淖詈棉k法.收到細(xì)胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,培養(yǎng)箱靜置2-4小時.鏡下觀察：未超過80%匯合度時,可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,加入6ml完全培養(yǎng)基,放入37℃ 5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時,根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟.（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻.在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻.然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中）,培養(yǎng)過夜.第二天換液并檢查細(xì)胞密度.
二 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng).
a） 對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣 鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次.
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化.
3.輕輕吹打細(xì)胞,完全脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻.
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中.
b） 對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中.
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中.
PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞,收到細(xì)胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi),嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存.若密度超過80%,可直接進行傳代（方法同上）.
三 細(xì)胞凍存：（注：非無血清凍存液方法,無血清凍存液方法請參考我司官網(wǎng)貨號：C7001）
1 細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次；
2 添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min；
3 用適量的凍存液重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中；
4 先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃
掃碼咨詢微信客服
掃碼咨詢微信客服
©Copyright 上海雅吉生物科技有限公司 All Rights Reserved. ICP備案號：滬ICP備18032507號-1 技術(shù)支持：阿儀網(wǎng)
<strike id="eoso2"></strike>
