傳代方法	第一次建議1:2傳代	凍存條件	細(xì)胞庫無血清凍存液
細(xì)胞描述	STR鑒定正確 該細(xì)胞被認(rèn)為是“1989年從一位66歲白人男性（pTa G3期）的惡性膀胱癌中培養(yǎng)出來的”；與細(xì)胞系BT-a的供體相同；然而，該株細(xì)胞DNA分型在細(xì)胞系檢索中找到完全匹配的細(xì)胞系，DSMZ數(shù)據(jù)庫顯示細(xì)胞名為BT-B，細(xì)胞號(hào)對應(yīng)227，Problematic cell line: Contaminated. Shown to be a HeLa derivative (PubMed=26116706)。 細(xì)胞STR位點(diǎn)信息：D5S818：11，12；D13S317：13.3，13.3；D7S820：8，12；D16S539：9，10;VWA :16,18；TH01：7，7；AMEL：X,X; TPOX :8,12; CSF1PO :9,10; DSMZ的DNA指紋和細(xì)胞遺傳學(xué)分析明確地證明，該細(xì)胞系必須被視為HELA的亞克隆 細(xì)胞遺傳學(xué)和STR分析明確證實(shí)BT-B與HELA在基因上是相同的。BT-B不能用作膀胱癌的模型。該細(xì)胞系被18型乳頭瘤病毒(人乳頭瘤病毒-18)感染。該細(xì)胞含有幾個(gè)拷貝，作為整合到真核基因組中的前病毒。整合的病毒基因組是不完整的，并表現(xiàn)出E2-L2區(qū)2-3 kb的缺失。 本庫的細(xì)胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者。
培養(yǎng)備注	用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng)

 

 細(xì)胞收到后處理：

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察：未超過80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松）

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。