| 細(xì)胞名稱 | 人視網(wǎng)膜周細(xì)胞-永生化 |
| 貨號(hào) | YS0878 |
| 種屬 | 人 |
| 組織來(lái)源 | 視網(wǎng)膜 |
| 永生化方法 | 轉(zhuǎn)入 Sv40 和 hTERT 基因 |
| 生長(zhǎng)方式 | 貼壁 |
| 安全性 | 所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù) |
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人視網(wǎng)膜周細(xì)胞培養(yǎng) | 培養(yǎng)基：DMEM 高糖+10%胎牛血清+1%雙抗 |
| 配套培養(yǎng)基：（YS-120） | |
| 溫度：37℃ | |
| 氣相：95%空氣，5%二氧化碳 | |
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人視網(wǎng)膜周細(xì)胞傳代 | 收到細(xì)胞后，請(qǐng)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)瓶外表進(jìn)行消毒，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行 1-2 小時(shí)的緩 |
| 沖，待細(xì)胞恢復(fù)基本生長(zhǎng)狀態(tài)后，進(jìn)行后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。 | |
| 在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況： | |
| （一）細(xì)胞未長(zhǎng)至 85%時(shí)，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到生物操作臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú) | |
| 菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，若培養(yǎng)瓶上無(wú)特殊標(biāo)注，吸去剩余培養(yǎng)液，只留 6-8ml培 | |
| 養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。 | |
| （二）細(xì)胞已長(zhǎng)滿（達(dá) 85-95%）。即可進(jìn)行傳代，具體步驟如下： | |
| 1.棄去培養(yǎng)液，用 PBS 洗滌 1-2 次， | |
| 2.加入 1.0ml 胰酶消化液，37℃消化，顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞回縮變圓、 | |
| 透亮、輕拍甁壁呈流沙樣脫落，則迅速拿回操作臺(tái)，加入雙倍的含 10%血清的完全培 | |
| 養(yǎng)液，終止消化并輕輕吹打細(xì)胞，使其變成單細(xì)胞懸液， | |
| 3.將細(xì)胞收集于離心管中離心 1000rmp/5min，棄上清，輕彈管底，將細(xì)胞彈散， | |
| 4.加入新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，進(jìn)行傳代、凍存， | |
| 5.如果沒(méi)有特別說(shuō)明，建議收到細(xì)胞后的第一次傳代比例為 1:2。 | |
| 注：1.觀察細(xì)胞密度最好用（4X物鏡）低倍鏡觀察，以便正確的判斷細(xì)胞密度；觀 | |
| 察細(xì)胞形態(tài)請(qǐng)用（10X 或 20X）高倍鏡觀察； | |
| 2.瓶中運(yùn)輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用，請(qǐng)換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)； | |
| 3.有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心重懸后接種到新瓶?jī)?nèi)； | |
| 4.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細(xì)胞污染，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。 | |
| 人視網(wǎng)膜周細(xì)胞保存 | 凍存條件：70%基礎(chǔ)培養(yǎng)液+20%胎牛血清+10%DMSO 保存條件：液氮存儲(chǔ) |
| 供應(yīng)限制 | 僅供研究之用 |
| 常見(jiàn)問(wèn)題 | 1.培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師 |
| 及 | 解決。 2.細(xì)胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開(kāi)封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2 小時(shí)后觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 8-10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度 85-95%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁， 將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我 們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問(wèn)題解決。。 |
| 解決方案 | |
