TMB顯色液(ELISA HRP顯色用)(TMB Chromogen Solution for ELISA, TMB Substrate Solution for ELISA or TMB
Solution for ELISA)是一種采用了最新單一溶液TMB顯色技術(shù)，通過辣根過氧化物酶(HRP)催化TMB顯色，用于ELISA等的顯色液。本顯色液也可以用于檢測血液或血紅蛋白等樣品中的過氧化物酶含量。
      通常的TMB顯色試劑由多個組份組成，必須在使用前進行配制，并且容易產(chǎn)生沉淀，使用相對不太方便，并且也容易導(dǎo)致檢測結(jié)果不太穩(wěn)定。本TMB顯色液采用了最新的TMB顯色技術(shù)，把所有的相關(guān)試劑全部配制在一個溶液中，僅由單一溶液組成，簡化了操作步驟，并且使檢測結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。
      TMB，即3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine，是辣根過氧化物酶的常用底物。在辣根過氧化物酶或其他適當(dāng)過氧化物酶的催化下，TMB會產(chǎn)生可溶性藍色產(chǎn)物。藍色產(chǎn)物通常可以在370nm或620-650nm測定吸光度。不同濃度辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記二抗使用本產(chǎn)品的檢測效果參見圖1。

      圖1. 不同濃度辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記二抗使用本產(chǎn)品的檢測效果圖。辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG (A0208)用PBS稀釋至圖中所示濃度，各取20微升，加入200微升本產(chǎn)品，分別在5分鐘和30分鐘時檢測A370。從結(jié)果可知，5分鐘時，HRP濃度在0-0.1%范圍內(nèi)呈較好的線性關(guān)系；30分鐘時，HRP濃度在0-0.06%范圍內(nèi)呈較好的線性關(guān)系。實測數(shù)據(jù)會因試劑、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。

      辣根過氧化物酶催化TMB顯藍色后可以使用TMB顯色終止液(450nm, 不含硫酸) (P0215)、TMB顯色終止液(650nm, 無腐蝕性) (P0217)或自行配制的2M H2SO4終止反應(yīng)。加入TMB顯色終止液(450nm, 不含硫酸)或硫酸后，溶液呈黃色，此時可以在450nm測定吸光度；加入TMB顯色終止液(650nm, 無腐蝕性)后，溶液保持藍色不變，此時可在620-650nm測定吸光度。兩種TMB顯色終止液加入后的吸光度檢測和實拍顯色效果圖參考圖2和圖3。

      圖2. 不同濃度辣根過氧化物酶加入本產(chǎn)品后，再使用TMB顯色終止液(450nm, 不含硫酸) (P0215)終止反應(yīng)后的檢測效果圖。左圖為不同濃度的HRP標(biāo)記的二抗(A0208 辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG (H+L))，加入本產(chǎn)品室溫反應(yīng)5分鐘后A370的吸光值，及加入TMB顯色終止液(450nm, 不含硫酸) A450的吸光值的線性圖。右圖為兩者的實拍顯色效果圖。圖中數(shù)據(jù)僅供參考，實際的檢測效果可能會略有不同。

      圖3. 不同濃度辣根過氧化物酶加入本產(chǎn)品后，再使用TMB顯色終止液(650nm, 無腐蝕性) (P0217)終止反應(yīng)后的檢測效果圖。左圖為不同濃度的HRP標(biāo)記的二抗(A0208 辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG (H+L))，加入本產(chǎn)品室溫反應(yīng)5分鐘后A370的吸光值，及加入TMB顯色終止液(650nm, 無腐蝕性) A650的吸光值的線性圖。右圖為兩者的實拍顯色效果圖。圖中數(shù)據(jù)僅供參考，實際的檢測效果可能會略有不同。

      本試劑盒最常用于ELISA檢測，也可以用于檢測血液或血紅蛋白等樣品中的過氧化物酶含量。
      用于ELISA檢測時，每個樣品通常使用0.2毫升顯色液，一個包裝的本產(chǎn)品共可以檢測約500個樣品。
包裝清單：

保存條件：
      4℃避光保存，一年有效。
注意事項：
      TMB對人體有刺激性，操作時請小心，并注意適當(dāng)防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
      本產(chǎn)品為無色至微藍色透明溶液，如果發(fā)現(xiàn)TMB顯色液出現(xiàn)混濁或顏色變成較深的藍色，應(yīng)該停止使用。
      本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1. 對于ELSIA檢測：
a. 參考ELISA試劑盒的實驗步驟，在與辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體孵育后，用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。
b. 洗滌完畢后，去除洗滌液，加入200微升TMB顯色液。
c. 室溫避光孵育3-30分鐘或更長時間(可長達24小時)，直至顯色至預(yù)期深淺。
d. 直接在370nm或620-650nm測定吸光度�；蚣尤�50微升TMB顯色終止液(450nm, 不含硫酸) (P0215)或TMB顯色終止液(650nm, 無腐蝕性) (P0217)，或自行配制2M H2SO4終止反應(yīng)，隨后在相應(yīng)波長測定吸光度。
2. 對于在96孔板內(nèi)進行的其他適當(dāng)檢測 (例如檢測組織或細胞樣品內(nèi)源性的過氧化物酶)：
a. 直接在96孔板內(nèi)每孔加入10-20微升樣品。
b. 加入200微升TMB顯色液。
c. 室溫避光孵育3-30分鐘或更長時間(可長達24小時)，直至顯色至預(yù)期深淺。
d. 直接在370nm或620-650nm測定吸光度。或加入50微升TMB顯色終止液(450nm, 不含硫酸) (P0215)或TMB顯色終止液(650nm, 無腐蝕性) (P0217)，或自行配制2M H2SO4終止反應(yīng)，隨后在相應(yīng)波長測定吸光度。
常見問題：
1. 背景顯色太深。
a. 如果背景(沒有樣品的對照)顯色太深，一方面需考慮使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進行封閉，例如選購適當(dāng)?shù)姆?/span>閉液或使用和一抗相同來源的血清(10%)進行封閉。另一方面，請選購經(jīng)過適當(dāng)吸附的二抗，以減小二抗的非特異性吸附。
b. 可以考慮縮短顯色時間，或降低二抗?jié)舛�。另外，選擇適當(dāng)強度的洗滌液，或延長洗滌時間也會有所幫助。
2. 沒有顯色或顯色太弱。
a. 適當(dāng)提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果，滴一滴稀釋二抗在離心管內(nèi)，檢測二抗是否可以被正常顯色。
b. 可以考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如使用生物素檢測體系。
c. 可以適當(dāng)延長顯色時間。
d. 如果上述改進不能獲得預(yù)期效果，可以考慮更換效果更好的一抗或ELISA試劑盒。​