| 名稱(Name) | 重組腸激酶；Recombinant Enterokinase |
| 別名(Synonyms) | 重組腸激酶輕鏈; Enterokinase, light chain; Enteropeptidase; Enterokinase; Serine protease 7; ENTK; MGC133046; PRSS7; TMPRSS15; protease, serine, 7 (enterokinase); PRSS7enteropeptidase; Serine protease 7; Transmembrane protease serine 15; transmembrane protease, serine 15 |
| 產(chǎn)品簡(jiǎn)介(Background) | 腸激酶是一種高度特異性絲氨酸蛋白酶，天然腸激酶由1條結(jié)構(gòu)亞基(重鏈)和1條催化弧基 (輕鏈)構(gòu)成, 兩者通過1個(gè)分子間二硫鍵結(jié)合, 結(jié)構(gòu)亞基負(fù)責(zé)將催化亞基固定在小腸刷狀緣膜上并引導(dǎo)它向腸腔移動(dòng), 催化亞基可以特異性識(shí)別Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列并沿序列的羧基端切下, 將胰蛋白酶原活化為胰蛋白酶, 從而啟動(dòng)各種酶原活化的級(jí)聯(lián)。重組牛腸激酶是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段，該酶經(jīng)HPLC純化，純度高，特異性高，不含其它蛋白酶，用于去除N-末端和Met-N-末端融合蛋白中的FLAG多肽(DDDDK, 并且K后面不是脯氨酸)，但不移除C端FLAG。腸激酶具有較寬pH范圍(4.5-9.5)和較寬溫度范圍。 |
| 產(chǎn)品用途(Applications) | 從N-末端和Met-N-末端融合蛋白中去除標(biāo)記肽； 蛋白質(zhì)修飾和氨基酸序列測(cè)定。 |
| 外觀(Physical appearance) | 澄清、無色至淡黃色液體 |
| 活性(Biological activity) | ≥ 5.0U/µl，一般為10U/µl，約為20,000U/mg pro，具體參考每批次標(biāo)簽或COA。 |
| 活力單位(Unit definition) | 1U定義為在25℃，12h~16h之內(nèi)，將0.5mg保存于25mM Tris-HCl (pH8.0)緩沖液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。 |
| 純度(Purity) | 單一主條帶 |
| 蛋白含量(Protein content) | - |
| 配方(Formulation) | Bovine EK is supplied in 50mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.5M NaCl and 50% glycerol. |
| 使用方法(Recommended usage) | 1) 25℃酶切(按照酶活性定義舉例)： 25mM Tris-HCl (pH8.0)體系中含F(xiàn)lag融合蛋白0.1-1mg/ml (蛋白總量50-100µg)，重組EK 0.1-0.2U。25℃酶切過夜或16-24h，在NC膜上用Dot blot的方法并用Flag抗體檢測(cè)酶切效果， 或使用SDS-PAGE進(jìn)行酶切效果檢測(cè)。注：不建議37℃條件下酶切，可能會(huì)有非特異性酶切出現(xiàn)。 2) 4℃低溫酶切條件： 4℃條件下也可對(duì)底物進(jìn)行有效酶切，但需要將酶切時(shí)間延長(zhǎng)至48-64h，或增加2-3倍酶量。 3) 酶切優(yōu)化和放大優(yōu)化： 優(yōu)化：可以對(duì)酶切條件進(jìn)行優(yōu)化，例如緩沖液pH、融合蛋白濃度、EK的量以及酶切時(shí)間，使融合蛋白能在穩(wěn)定條件下被酶切，用SDS-PAGE檢測(cè)酶切效果。 放大：選擇優(yōu)化后的反應(yīng)條件，按該條件等比例放大，用SDS-PAGE檢測(cè)酶切效果。 4) 去除重組腸激酶的方法： 如果使用親和層析，可以利用胰蛋白酶抑制劑親和膠，由于腸激酶是一種絲氨酸蛋白酶，胰蛋白酶抑制劑可以與腸激酶結(jié)合，從而達(dá)到純化目的。建議利用離子交換層析分離去除微量的腸激酶。 pH8.0，腸激酶與DEAE膠結(jié)合，并且在0.15M NaCl中可以被洗脫。可以利用目的蛋白與腸激酶電荷以及與DEAE膠的結(jié)合以及洗脫的不同條件將二者進(jìn)行分離。 5) 在咪唑<100mM，或NaCl<50mM，或甘油< 5%進(jìn)行酶切，酶的用量與蛋白的比例不變。在>200mM咪唑，或>200mM NaCl，或>5%甘油的條件下，酶切效果會(huì)受影響�？蓞⒄找韵峦扑]方法進(jìn)行酶切： a.為獲得理想酶切結(jié)果，請(qǐng)將樣品透析至25mM Tris-HCl (pH8.0)緩沖液中，再進(jìn)行酶切。 b.若不便透析，可將樣品稀釋，咪唑含量在100mM以下，NaCl濃度在50mM以下，甘油濃度小于5%以下進(jìn)行酶切，酶的用量與蛋白的比例不變(即1U酶切500μg蛋白)。 c.如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種，且不便去除，此時(shí)適當(dāng)增加酶量或延長(zhǎng)酶切時(shí)間，也可達(dá)到較好酶切效果。 |
| 穩(wěn)定性(Stability) | -20℃，24個(gè)月穩(wěn)定；25℃，一周內(nèi)，無活性損失。緩沖體系：50mM Tris-HCl，pH8.0，250mM NaCl，2mM Ca2+，50%甘油。 酶液反復(fù)凍融穩(wěn)定性：反復(fù)凍融5次，無活性損失。 |
| 氨基酸序列(Amino acid sequence) | IVGGSDSRE GAWPWVVALY FDDQQVCGAS LVSRDWLVSA AHCVYGRNME PSKWKAVLGL HMASNLTSPQ IETRLIDQIV INPHYNKRRK NNDIAMMHLE MKVNYTDYIQ PICLPEENQV FPPGRICSIA GWGALIYQGS TADVLQEADV PLLSNEKCQQ QMPEYNITEN MVCAGYEAGG VDSCQGDSGG PLMCQENNRW LLAGVTSFGY QCALPNRPGV YARVPRFTEW IQSFLH 備注：本氨基酸序列僅供參考，實(shí)際氨基酸長(zhǎng)度或序列可能有一定變化。 |
| 產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)(Advantage) | 無動(dòng)物源性：重組生產(chǎn)，無外源性的病毒污染，生產(chǎn)過程不使用任何動(dòng)物源原料。 質(zhì)量穩(wěn)定：批量生產(chǎn)，可保證穩(wěn)定連續(xù)的批次生產(chǎn)；產(chǎn)品批次間無差異，質(zhì)量穩(wěn)定。 純度高：比活高；宿主蛋白殘留小于生物制品限度要求。 凍干粉：易于儲(chǔ)存和運(yùn)輸。 符合法規(guī)要求：生產(chǎn)設(shè)備和生產(chǎn)環(huán)境符合相關(guān)法規(guī)要求，生產(chǎn)過程完全遵循NSF ISO 9001:2015質(zhì)量體系并符合GMP指導(dǎo)原則。 |
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| P4237-100U | 重組腸激酶 | 100U |
| P4237-500U | 重組腸激酶 | 500U |
| P4237-1000U | 重組腸激酶 | 1000U |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存，兩年有效。
注意事項(xiàng)：
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1.收到產(chǎn)品后請(qǐng)立即按照說明書推薦的條件保存。除非特別注明，相關(guān)產(chǎn)品均為凍干粉，由于微量的蛋白在凍干過程中沉積在管內(nèi)，形成很薄或不可見的蛋白層，所以在打開管蓋前，我們建議在離心機(jī)中約8,000-12,000g離心10-30秒，使附著在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底。
2.大多數(shù)細(xì)胞因子或重組蛋白的凍干粉是非常容易溶解的，一般用移液槍的槍頭輕吹幾下或者輕輕搖晃瓶子，即可使細(xì)胞因子或重組蛋白完全溶解。請(qǐng)勿用vortex劇烈振蕩，以免蛋白變性而失活。
3.具體的最佳工作濃度請(qǐng)自行參考相關(guān)文獻(xiàn)，或者根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康�，以及特定�?xì)胞和動(dòng)物，通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)行摸索和優(yōu)化。
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