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酸洗玻璃珠系列

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注:上欄中為正常紅細胞(紅色)和鐮刀型紅細胞(黃色)照片

 

產(chǎn)品及特點

本產(chǎn)品是用濃酸充分洗滌后的玻璃珠,它是玻璃珠法破碎細菌和真菌的必備成分,主要用于從具有堅硬外壁的微生物細胞(如真菌孢子、酵母細胞、結核細胞等)中提取DNA、RNA和蛋白質大分子,因為用其他方法,包括酶解方法都很難沉底破碎具有堅硬外壁的微生物細胞。本產(chǎn)品具有下列特點:

1. 經(jīng)過充分的酸洗,免去用戶接觸具有腐蝕性的濃酸。

2. 用本產(chǎn)品破碎具有堅硬外壁的微生物細胞,屬于物理方法,不但比溫和的化學破壁法普適性更好、重復性更好,同時不需要使用酶,因此不容易被酶中的外源核酸或蛋白質污染。

3. 用玻璃珠破碎法提取一個樣品只需要10余分鐘時間,非?旖荨W⒁猓罕井a(chǎn)品需要跟本公司提供的裂解液、上柱液、離心吸附柱等配合使用才能用于核酸純化。

4. 一次可以處理5 mL的微生物樣品。

 

本系列產(chǎn)品有各種規(guī)格、適用于不同材料。具體請參考下表

 

產(chǎn)品編號

玻璃珠直徑

最適用途

100307A-10

100 μm

作為超聲破碎細菌時的添加物

100307B-10

200 μm

破碎細菌

100307C-10

400 μm

破碎酵母(如釀酒酵母)

100307D-10

800 μm

破碎霉菌、孢子等

 

使用方法及效果

以我公司玻璃珠法柱式真菌DNAout試劑盒(CAT#:100303)為例:離心收集1-5 mL過夜培養(yǎng)的真菌細胞,加入0.5 mL 溶液A和體積相當于0.5 mL的、直徑為

400 μm玻璃珠(大約0.5克),振蕩器上以最高速度振蕩10分鐘,,再加入0.5 mL 溶液B,震蕩2分鐘,2000 rpm離心2分鐘,在上清中加入3倍體積的溶液C,上柱,用通用洗滌液洗兩次,干甩一次,最后用50-100 μL DNA洗脫液洗脫基因組DNA待用。

 使 產(chǎn) C   

 

100307C)提取3 mL過夜培養(yǎng)的畢赤酵母菌液,最后用50 μL DNA洗脫液洗脫,5 μL 用于瓊脂糖電泳。電壓300V, 電泳時間5分鐘,染料為綠如藍, 緩沖液為SuperBuffer。

答客問

Q: 為何要使用酸洗玻璃珠而不是普通玻璃珠?

 

A: 酸洗的目的一是去粉末、二是去金屬離子。普通玻璃珠中含有很多玻璃粉末, 它們本質是二氧化硅,所以會吸附核酸,而此處使用玻璃珠的目的是破碎細胞而不是吸附核酸(吸附核酸所需玻璃珠直徑遠小于破碎細胞的直徑),所以需要預先將其洗滌去除。同時,普通玻璃珠中還有帶有很多重金屬元素,它們會使核酸降解、使蛋白質變性,所以需要用濃酸將其去除。

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