聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)是目前分離200 nt以下的小片段RNA,尤其是20 nt左右的microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是目前市場(chǎng)上用于從聚丙烯酰胺凝膠中回收miRNA片段的產(chǎn)品還很少,為此開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn):
1. 可以回收15-200 nt的各種長(zhǎng)度的RNA,包括100nt以下的miRNA片段。
2. 溶液A中含有RNA助沉劑RNADOWN,miRNA回收率最高達(dá)到90%左右。
3. 一站式,即開(kāi)即用,操作簡(jiǎn)單,用戶不需要自備任何試劑。
4. 擴(kuò)容性好,可小規(guī)模操作,也可以大規(guī)模操作。
試劑盒含固相RNase清除劑,可清除工作環(huán)境中RNase的污染。
將切下的含小RNA片段的PAGE膠條放入1.5 mL RNase-free 塑料離心管中,- 20℃或更低溫度冷凍10-30分鐘后用微型離心管專(zhuān)用研磨杵搗碎,加入相當(dāng)于膠重 量2-3倍的溶液A,在搖床上4℃搖晃3-5小時(shí),13000-15000 g 4℃離心10分鐘, 取上清,再用0.2 mL溶液A洗滌搗碎的PAGE膠,離心后合并上清,加入2倍體積的溶液B,13000-15000 g 4℃離心10分鐘,用1 mL溶液C洗滌一次后離心所得沉淀即為回收的RNA片段,溶解在適量RNase-free水中待用