本產(chǎn)品是基于Feinberg和Vogelstein發(fā)明的隨機引物標記法而開發(fā)出來的即用型DNA探針標記試劑盒,標記過程由雙鏈DNA熱變性、隨機引物與單鏈DNA結合、在Klenow DNA聚合酶催化下,引物的延伸合成DNA探針并摻入標記的核苷酸三步組成,可用下面的示意圖表示
本產(chǎn)品在上述原理的基礎上本產(chǎn)品的特點是:
1. 使用十聚引物,復性效率比六聚引物更高。
2. 使用無外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶,已標記DNA探針不會被酶降解。
3. 快速,最快1小時即可完成標記反應。
4. 所得DNA探針比活性高(對同位素可以達到109 cpm/ μg DNA),檢測靈敏度高。
5. 所需模板DNA量少(只需要10 ng以上即可),DNA可以是各種形狀(線狀和環(huán)狀)的、也可以是單鏈或雙鏈的,長度在100 bp以上均可。
6. 得到的探針長度在200-400 nt之間,可以用于Southern雜交、Northern雜交、原位雜交、菌落和斑點印跡雜交等。
7. 三種標記選擇,其中90603A可用于各種同位素標記和其他任何非同位素標記,但需自備標記底物;90603B和90603C可分別用于生物素和地高辛標記。
使用及效果
將10ng-3 μg的DNA模板在水(終體積不超過14 μL)中變性5分鐘后放冰上, 加入2 μL 10×標記緩沖液、1 μL Klenow exo-酶、1 μL 標記核苷酸(A型中不提供),混合后37℃保溫1-20小時,加入1 μL自備的0.5M EDTA終止反應。所得標記探針可以直接使用或者放-20℃長期保存。