蛋白酶抑制劑混合物(通用型, 100X) (Protease inhibitor cocktail for general use, 100X) 是一種通用型用于細胞或組織蛋白提取等的蛋白酶抑制劑混合物(200mM AEBSF, 30μM Aprotinin, 13mM Bestatin, 1.4mM E64 and 1mM Leupeptin in DMSO),并提供獨立包裝的0.1M EDTA。
細胞或組織提取物等樣品中含有許多內源性的蛋白酶、磷酸酶等,容易導致提取物中的蛋白降解或去修飾,從而影響后續(xù)的蛋白檢測。因此在提取物等樣品中添加適當?shù)牡鞍酌、磷酸酶等抑制劑是防止蛋白降解和去修飾的有效方法?br />本產(chǎn)品為經(jīng)優(yōu)化和測試的用于常規(guī)細胞或組織蛋白提取等的蛋白酶抑制劑混合物,包含了廣譜的絲氨酸、半胱氨酸和酸性蛋白酶抑制劑、以及氨基肽酶抑制劑。具體組分與Sigma及Millipore同類產(chǎn)品的比較見表1。
表1. 蛋白酶抑制劑混合物(通用型, 100X)與Sigma及Millipore同類產(chǎn)品的比較:
品牌 | Beyotime | Sigma | Millipore |
產(chǎn)品編號 | P1005/P1006 | P2714/S8820 | 539131 |
產(chǎn)品形式 | 100X | 如配制為100X | 如配制為100X |
AEBSF | 200mM | 200mM | 50mM |
Aprotinin | 30μM | 30μM | 15μM |
Bestatin | 13mM | 13mM | - |
E64 | 1.4mM | 1.4mM | 0.1mM |
Leupeptin | 1mM | 0.1mM | 0.1mM |
EDTA | 100mM | 100mM | 50mM |
本蛋白酶抑制劑混合物含200mM AEBSF, 30μM Aprotinin, 13mM Bestatin, 1.4mM E64和1mM Leupeptin (參考表1),配制在高純度DMSO中。EDTA為單獨包裝,以便選擇性使用。如用于檢測金屬蛋白酶活性,則不宜添加EDTA。
本產(chǎn)品使用便捷,通常以1:100的比例分別把蛋白酶抑制劑混合物(通用型, 100X)和0.1M EDTA加入裂解液中,即可用于常規(guī)的細胞或組織蛋白的提取,并有效抑制蛋白降解。
不同類型的蛋白提取物中含有不同類型的蛋白酶。例如,哺乳動物細胞提取物中通常含有高豐度的絲氨酸蛋白酶,細菌細胞提取物通常含有較多的絲氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶,哺乳動物組織提取物中主要含有絲氨酸、半胱氨酸和金屬蛋白酶,植物提取物中常含有大量的絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶,還有一些含有天冬氨酸蛋白酶。為此針對不同類型樣品的蛋白提取,提供了不同類型的蛋白酶、磷酸酶等抑制劑混合物以供選擇,具體請參考附表1。
本產(chǎn)品可以有效抑制常規(guī)細胞或組織提取物中的各種蛋白酶活性,如絲氨酸蛋白酶、氨基肽酶、半胱氨酸蛋白酶、蘇氨酸和天冬氨酸蛋白酶、金屬蛋白酶等。其中AEBSF是一種水溶性的絲氨酸蛋白酶不可逆抑制劑,其抑制常數(shù)與PMSF和DFP的抑制常數(shù)相似,可以有效抑制胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、纖溶酶(plasmin)、激肽釋放酶(kallikrein)和凝血酶(thrombin)等蛋白酶,作為PMSF和DFP的替代物,AEBSF的毒性更低、水溶性和水溶液穩(wěn)定性更好。Aprotinin是絲氨酸蛋白酶的競爭性可逆抑制劑;Bestatin是氨基肽酶可逆抑制劑;E64是半胱氨酸蛋白酶不可逆抑制劑;Leupeptin是絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶可逆抑制劑;EDTA作為螯合劑是金屬蛋白酶的可逆抑制劑。各種抑制劑的具體信息請參考附表2。
一個包裝的本產(chǎn)品通常足夠用于100ml裂解液的配制。
包裝清單:
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
P1005-1 | 蛋白酶抑制劑混合物(通用型, 100X) | 1ml |
P1005-2 | 0.1M EDTA, pH 8.0 | 1ml |
— | 說明書 | 1份 |
保存條件:
-20℃保存,一年有效。
注意事項:
本產(chǎn)品可以適當分裝后保存,并應在臨使用前添加到裂解液等適當溶液中。
本產(chǎn)品提供了獨立包裝的EDTA,可以選擇性使用。例如,后續(xù)用于檢測提取液中金屬蛋白酶活性,則不宜添加EDTA。
本產(chǎn)品中含有的蛋白酶抑制劑對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明:
1. 本蛋白酶抑制劑混合物為100X的儲存液,使用時按照1:100的比例加入到裂解液中(例如,1ml裂解液中加入10μl蛋白酶抑制劑混合物),混勻后即可使用。含有蛋白酶抑制劑混合物的裂解液宜現(xiàn)用現(xiàn)配,不宜配制后凍存待后續(xù)使用。根據(jù)需要,0.1M的EDTA也按照1:100的比例加入到裂解液中。待所需的抑制劑添加完畢并混勻后,就可以開始進行常規(guī)細胞或組織的裂解和蛋白提取。