細胞程序性壞死誘導試劑盒(TSZ法) (Necroptosis Inducer Kit with TSZ)是由TNF-α、SM-164和Z-VAD-FMK (簡稱TSZ)按一定的比例混合而成，可以非常有效地誘導細胞程序性壞死。
本產品可以非常有效地誘導L-929、HT-29等細胞的程序性壞死。使用本產品誘導L-929細胞程序性壞死的效果圖參考圖1。
圖1. 本產品誘導L-929細胞程序性壞死的效果圖。本產品處理L-929細胞4-5小時，并用Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒(C1062)進行凋亡和壞死檢測。綠色熒光為Annexin V-FITC染色，是凋亡或壞死陽性細胞；紅色熒光是PI染色，是壞死陽性細胞；綠色熒光和紅色熒光重疊的是壞死細胞；僅綠色熒光的是凋亡細胞。
細胞死亡包括凋亡(apoptosis)、壞死(necrosis)、焦亡(pyroptosis)等多種形式。其中受調控的細胞死亡被稱為程序性細胞死亡(programmed cell death, PCD)，而不受調控的細胞死亡被稱為壞死。程序性細胞死亡包括凋亡、細胞程序性壞死(programmed necrosis)或壞死性凋亡(necroptosis)和焦亡等。
細胞凋亡是生物體發(fā)育等生命過程中普遍存在的、由基因決定的細胞主動有序的死亡方式。當細胞遇到內、外環(huán)境因子刺激時，啟動基因調控的自殺保護措施，去除體內非必需細胞或即將發(fā)生特化的細胞。在這一過程中，細胞脫落離體或裂解為若干凋亡小體，并迅速被巨噬細胞或鄰近細胞清除，不會導致炎癥反應，這是一種由基因控制、高度有序的細胞自主死亡，包含一系列信號事件組成的通路。細胞凋亡的主要特征包括細胞膜保持完整、細胞膜磷脂酰絲氨酸外翻(Annexin V染色陽性)、基因組DNA片段化(DNA fragmentation)(即產生DNA ladder并且TUNEL染色陽性)、電鏡或熒光染色時細胞核碎裂或致密濃染、Caspase 3等激活、線粒體膜電位下降、細胞色素c從線粒體內釋放等。
壞死是由非特異性和非生理壓力誘導產生的一種偶然且非調控、被動的細胞死亡，如物理性或化學性的損害因素及缺氧與營養(yǎng)不良等都可以導致細胞壞死。壞死細胞的膜通透性增高，致使細胞腫脹，細胞器變形或腫大，早期核無明顯形態(tài)學變化，最后細胞破裂，細胞裂解后釋放出內含物，并常引起炎癥反應，但沒有凋亡或自吞噬標志物。通常，凋亡對生命體是有利的，而壞死很可能是有害甚至是致命的。
細胞程序性壞死(programmed necrosis)或壞死性凋亡(necroptosis)是一種新型的高度受調控的細胞死亡方式，與機體先天免疫反應、炎癥相關疾病的發(fā)生發(fā)展等關系密切，如細菌和病毒感染，或動脈粥樣硬化等無菌損傷導致的炎性病變。在凋亡發(fā)生條件缺乏時(主要是Caspase 8被抑制)，特別是含caspase抑制劑的條件下，腫瘤壞死因子受體家族(TNF-α receptor)以及Toll-like的受體家族啟動，并通過和受體蛋白相關作用的兩個蛋白激酶RIP1和RIP3傳遞死亡信號，RIP3可使其特異性底物蛋白MLKL磷酸化，從而使MLKL從單體狀態(tài)向多聚體狀態(tài)的轉化。多聚化的MLKL可以結合磷酸磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol phosphates)和線粒體特異的心磷脂(cardiolipin)，從而從細胞質轉移到細胞膜和細胞器膜上，并在這些膜結構中形成通透性孔道，繼而破壞膜的完整性，引起細胞壞死 。最新研究也表明，在TNF-α刺激下，RIP3的磷酸化激活丙酮酸脫氫酶復合體(pyruvate dehydrogenase complex, PDC)，促進細胞耗氧及ROS產生，從而增強壞死小體形成。越來越多的研究表示，程序性壞死是一種重要的細胞死亡機制，在腦缺血、心急缺血、急性和慢性神經退行性疾病、腫瘤等多種人類病理活動中具有重要作用。
細胞焦亡(pyroptosis)也是一種新的細胞程序性死亡方式，表現(xiàn)為細胞不斷脹大直至細胞膜破裂，導致細胞內容物的釋放進而激活強烈的炎癥反應。細胞焦亡是機體重要天然免疫反應，在拮抗感染和內源危險信號中發(fā)揮重要作用。相比于細胞凋亡，細胞焦亡發(fā)生的更快，并會伴隨大量促炎癥因子的釋放。
細胞凋亡(apoptosis)、程序性壞死(necroptosis)和焦亡(pyroptosis)的主要區(qū)別見下表：
| Apoptosis | Necroptosis | Pyroptosis | |
| Trigger | Death receptor activation | Death receptor activation when caspase-8 is inhibited | Activation of inflammasomes by pathogens |
| Inflammatory response | No | Yes | Yes |
| Key proteins | Caspase family | RIPK1、RIPK3、MLKL | Caspases 1、4、5 and 11、Gasdermin D |
| Morphology | Cell rounding、blebbing、formation of apoptotic bodies | Organ swelling、membrane rupture、release of cell contents | Plasma membrane rupture、release of cell contents、maintained mitochondrial integrity |
| Programmed cell death | Yes | Yes | Yes |
腫瘤壞死因子-α (Tumor Necrosis Factor-alpha, TNF-α)是一種主要由巨噬細胞和其它一些類型細胞如CD4+淋巴細胞、NK細胞等產生的促炎細胞因子，不僅具有選擇性殺傷某些腫瘤細胞的功能，而且有多種免疫調節(jié)作用。生理條件下具有生物學活性的人腫瘤壞死因子-α (hTNF-α)是一個緊密的三聚體，其活性位點位于兩個相鄰亞基之間的V型結構域，hTNF-α有兩種不同的受體TNFR1和TNFR2，分別介導不同的生物學活性。在對hTNF-α結構與功能研究的基礎上，人們對其N末端、C末端和受體結合位點進行基因改造，研制了一系列衍生物，以提高hTNF-α的抗腫瘤活性，降低毒副反應。
SM-164是Smac (Second mitochondria-derived activator of caspase)的二價模擬物，可滲透細胞，對cIAP-1、cIAP-2和XIAP的抑制常數(shù)Ki分別為0.31nM、1.1nM和0.56nM。SM-164是一種抗癌劑，可以誘導腫瘤細胞中cIAP-1/2的降解、拮抗XIAP、誘導TNFα依賴性的凋亡，從而發(fā)揮其抗腫瘤作用。
Z-VAD-FMK (carbobenzoxy-valyl-alanyl-aspartyl-[O-methyl]-fluoromethylketone)是一種可穿透細胞膜的泛Caspase抑制劑，可與caspase的催化活性部位發(fā)生不可逆結合，抑制細胞凋亡。
對于6孔板，每孔2ml細胞培養(yǎng)液時，本試劑盒可用于100或500個細胞樣品的程序性壞死誘導；對于96孔板，每孔200μl細胞培養(yǎng)液時，可用于1000或5000個細胞樣品的程序性壞死誘導。
包裝清單：
| 產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
| C1058S | 細胞程序性壞死誘導試劑(1000X) | 200μl |
| C1058M | 細胞程序性壞死誘導試劑(1000X) | 200μl×5 |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存，一年有效。
注意事項：
為確保取得良好的使用效果，第一次解凍后建議適當分裝保存。
由于細胞程序性壞死的誘導具有細胞特異性，不同細胞發(fā)生壞死的機制也不盡相同，因此本產品不能確保可以誘導任意一種細胞的程序性壞死。
本產品對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。
本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 按照1:1000的比例將細胞程序性壞死誘導試劑(1000X)加入到待誘導細胞的培養(yǎng)液中，適當混勻。
2. 正常條件下培養(yǎng)2、4、8、12或24小時后觀察細胞程序性壞死的情況。對于L-929細胞和HT-29細胞，通常4小時左右在顯微鏡下可以看到明顯的細胞形態(tài)變化，此時可以檢測到非常明顯的細胞壞死。如果誘導其它種類的細胞或培養(yǎng)條件有所變化，請自行摸索細胞程序性壞死誘導試劑(1000X)的稀釋比例和誘導時間
