Western螢光檢測試劑ECL Plus是一種超敏ECL化學發(fā)光試劑盒，本產品與二抗上偶聯(lián)的辣根過氧化物酶發(fā)生化學反應，發(fā)出螢光，從而可以通過用X光片壓片或其它適當化學發(fā)光成像設備檢測樣品。

Western螢光檢測試劑目前共有三種。常規(guī)的Western檢測，優(yōu)先推薦使用ECL Star。對于豐度比較高的目的蛋白的檢測，例如內參蛋白等的檢測，推薦使用性價比更高的ECL Plus。對于低豐度較難檢測的目的蛋白，優(yōu)先推薦使用檢測靈敏度最高的ECL Moon。但對于豐度適中的目的蛋白的檢測，不太推薦使用ECL Moon，因為使用ECL Moon時由于檢測靈敏度特別高，容易產生過曝的現(xiàn)象。
ECL Plus靈敏度高，比DAB顯色的靈敏度至少高200倍，比Amersham公司的ECL或以前生產的ECL的靈敏度高20-50倍左右，比Pierce公司的SuperSignal West Pico Substrate的靈敏度高3-100倍。
ECL Plus的發(fā)光時間更長。在100微升1微克/毫升辣根過氧化物酶標記IgG中，加入100微升的ECL Plus工作液或Pierce公司的SuperSignal West Pico Substrate工作液進行檢測。在暗房中，兩者均可發(fā)出肉眼可見的藍色螢光，但加入ECL工作液的試管內的亮度明顯高很多。最初數(shù)分鐘內加入ECL Plus工作液的試管發(fā)光強度是加入SuperSignal West Pico Substrate工作液的試管的3倍。約30分鐘后，加入ECL Plus工作液的試管仍然可以發(fā)出肉眼可見的較強的藍色螢光，而加入Pierce公司的SuperSignal West Pico Substrate工作液的試管發(fā)出的螢光已經很難用肉眼進行分辨，定量結果顯示此時加入ECL Plus工作液的試管發(fā)光強度是加入SuperSignal West Pico Substrate工作液的試管的100倍以上(參考圖1)。

圖1. ECL Plus和Pierce公司SuperSignal West Pico效果比較圖。詳細的比較方法如上所述。

ECL Plus的高靈敏度可以大大節(jié)省寶貴的樣品以及非常昂貴的一抗和二抗的用量。同時必須注意適當減少一抗和二抗或樣品的用量，以免獲得過深的難以比較灰度的條帶。
ECL Plus和CL Star的檢測效果對比圖參考圖2。

圖2. ECL Plus和ECL Star的檢測效果對比圖。Western檢測過程中僅發(fā)光試劑不同，其余完全相同。

ECL Plus采用了全新配方，更加穩(wěn)定。ECL Plus的兩種試劑37℃水浴孵育30天，和4℃保存的試劑相比，對相同樣品的檢測效果無任何明顯差異。
ECL Plus的背景很低，對PVDF膜和硝酸纖維素膜均適用。PVDF膜(FFP36/FFP39)和硝酸纖維素膜(FFN03)可以向訂購。
包裝清單：

保存條件：
4℃避光保存，一年有效。37℃避光保存，一個月有效。如果長期不用，可以-20℃避光保存。-20℃可以保存更長時間。
注意事項：
ECL Plus A液和B液在吸取過程中必須要更換槍頭，A液和B液相互污染后會導致A液或B液逐漸失效，影響后續(xù)的使用效果。
各溶液使用后，請蓋緊瓶蓋，以防失效。特別是B液，含有氧化劑，比較容易被還原而失效。
ECL Plus的螢光持續(xù)時間很長，但開始反應后的30分鐘內螢光更強一些，隨后螢光會逐漸減弱，因此請注意充分利用這螢光較強的30分鐘進行壓片。
在ECL Plus的檢測靈敏度仍不足以滿足實驗需要時，請選擇檢測靈敏度更高的
ECL Plus A液和B液均對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。
本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 

使用說明：
1. Western實驗步驟可以參考官網
2. ECL Plus工作液的配制：等體積混合適量ECL Plus A液和B液，室溫放置備用。工作液宜在臨檢測前配制。
3. Western二抗孵育后，并進行數(shù)次洗滌后，用WB專用鑷子(FS035)將膜取出，用吸水紙略吸去過多的液體(切勿接觸膜的蛋白面)，然后置于一潔凈保鮮膜上。
4. 根據(jù)膜的大小，按每10平方厘米膜加1ml ECL Plus工作液的比例，滴加ECL Plus工作液到膜上，確保使工作液均勻覆蓋在膜上，放置1-2分鐘。
5. 取膜，棄ECL Plus工作液，用吸水紙略吸去過多的液體。將膜放在兩片保鮮膜中間，隨后進行壓片檢測或化學發(fā)光成像儀檢測。
6. 壓片檢測：將膜固定于片夾內。暗室內壓片1分鐘，立即顯影定影，根據(jù)結果再調整壓片時間。或直接分別壓片30秒，1、3、5分鐘，然后一起顯影定影觀察結果。
7. 化學發(fā)光成像儀檢測：將膜放置到化學發(fā)光成像儀內，參考儀器說明書進行檢測。