生產(chǎn)的抗酒石酸酸性磷酸酶檢測試劑盒(Tartrate Resistant Acid Phosphatase Assay Kit)是一種用于快速、便捷地檢測細胞或組織樣品的裂解或勻漿產(chǎn)物的上清液、血漿、血清、尿液等樣品中內(nèi)源性的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性的試劑盒。
酸性磷酸酶(Acid Phosphatase)，也稱酸性磷酸酯酶，在酸性條件下可以催化磷酸酯鍵的水解。酸性磷酸酶是一個蛋白家
族，哺乳動物中其分子量從18kD到100kD不等。酸性磷酸酶主要分為兩類，一類為抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase, TRAP)，一類為抗氟離子酸性磷酸酶。
抗酒石酸酸性磷酸酶是一種糖基化的含金屬蛋白酶，在破骨細胞(osteoclast)和破軟骨細胞(chondroclast)中高表達。在活化的巨噬細胞和神經(jīng)元中也有表達�？咕剖崴嵝粤姿崦冈诩毎盘栟D(zhuǎn)導(dǎo)、細胞增殖和分化等方面起重要作用，也和活性氧產(chǎn)生和鐵離子轉(zhuǎn)運等有關(guān)�？咕剖崴嵝粤姿崦缚梢员黄乒羌毎尫诺窖褐�，幾乎被認為是是機體破骨活性的唯一血液指標。
在一些疾病狀態(tài)下，如白血病性網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥(leukaemic reticuloendotheliosis)、戈謝病(Gaucher's disease)、艾滋病導(dǎo)致的腦病(HIV-induced encephalopathy)、破骨細胞瘤(osteoclastoma)、骨質(zhì)疏松(osteoporosis)和代謝性骨疾病
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| P0332-1 | 檢測緩沖液 | 15ml |
| P0332-2 | 顯色底物 | 2管 |
| P0332-3 | 酒石酸溶液 | 1ml |
| P0332-4 | p-nitrophenol溶液(10mM) | 0.1ml |
| P0332-5 | 反應(yīng)終止液 | 20ml |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存，一年有效。顯色底物和p-nitrophenol溶液需避光保存。
注意事項：
如果希望進行酶活性的絕對定量，進行酶反應(yīng)時必須注意精確計時。此時推薦采用孵育30分鐘等較長的時間，以減小操作過程中的時間誤差。同時如果樣品中酶活性較高，則可以預(yù)先適當稀釋樣品。
樣品溶液中須避免出現(xiàn)各種酸性磷酸酶抑制劑。
一管顯色底物配制后需當日使用完畢，因此請注意適當多準備一些樣品一起檢測，以避免試劑盒浪費。
p-nitrophenol溶液對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。反應(yīng)終止液有腐蝕性，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或腐蝕其他物品。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 試劑準備：將所有試劑取出，恢復(fù)至室溫使用。
a. 顯色底物溶液：取一管顯色底物，溶解于2.5ml的檢測緩沖液中，充分溶解和混勻，冰上放置。新鮮配制的顯色底物溶液需在6小時內(nèi)使用。
b. 標準品工作液：取10μl p-nitrophenol溶液(10mM)，用檢測緩沖液稀釋至0.2ml，最終濃度為0.5mM。
2. 樣品準備：
a. 細胞或組織裂解液的準備：采用適當細胞或組織裂解液裂解細胞或組織，建議使用的P0013J Western及IP細胞裂解液(無抑制劑)裂解相關(guān)樣品。如果有必要需進行適當勻漿，隨后離心取上清，用于抗酒石酸酸性磷酸酶的檢測。注意：裂解液中不能含有磷酸酶抑制劑。樣品可以-80℃凍存，但需避免反復(fù)凍融。
b. 血漿、血清和尿液的準備：血漿和血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，但為了消除樣品本身顏色的干擾，需設(shè)置加了血漿或血清但不加底物的對照。尿液通常也可以直接用于測定。上述樣品可以-80℃凍存，但需避免反復(fù)凍融。
c. 樣品的稀釋：如果樣品中含有較高活性的抗酒石酸酸性磷酸酯酶，可以使用原有的裂解液或PBS等進行稀釋，也可以采用試劑
盒中的檢測緩沖液進行稀釋。如果使用試劑盒中提供的檢測緩沖液進行稀釋，需注意保留足夠的檢測緩沖液用于試劑盒的檢測過程。
3. 參考下表使用96孔板設(shè)置空白對照孔、標準品孔和樣品孔。標準品的用量分別為4、8、16、24、32和40微升，樣品通�？梢灾苯蛹�40微升。如果樣品中的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。樣品的檢測最好能設(shè)置平行孔或三復(fù)孔。
| 空白對照(Blank) | 標準品(Standard) | 樣品(Sample) | |
| 檢測緩沖液 | 40μl | (80-x)μl | (40-y)μl |
| 顯色底物 | 40μl | － | 40μl |
| 酒石酸溶液 | 5μl | 5μl | 5μl |
| 樣品 | － | － | yμl |
| 標準品工作液 | － | xμl | － |
4. 用槍頭輕輕吹打混勻，也可借助搖床進行混勻。
5. 37℃孵育5-10分鐘。(說明：待測樣品中酒石酸酸性磷酸酶活性較低時，可適當延長孵育時間至30分鐘)
6. 每孔加入160μl反應(yīng)終止液終止反應(yīng)。此時，標準品或有酒石酸酸性磷酸酶活性的孔會呈現(xiàn)不同深淺的黃色。
7. 在405nm測定吸光度。如果不能測定405nm，也可以在400-415nm范圍內(nèi)檢測吸光度。如果不能立即測定，可以在數(shù)小時內(nèi)完成測定，所顯現(xiàn)的黃色在數(shù)小時內(nèi)穩(wěn)定。
8. 酸性磷酸酶活性單位的定義：在pH4.8，37℃條件下，每分鐘水解para-nitrophenyl phosphate顯色底物產(chǎn)生1微摩爾
p-nitrophenol所需的酸性磷酸酶的量定義為一個酶活力單位。
9. 根據(jù)酶活性定義，計算出樣品中的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性。
