機(jī)體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基,后者能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸,引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用,并因此形成脂質(zhì)過氧化物。如:醛基(丙二醛MDA)、酮基、羥基、羰基、氫過氧基或內(nèi)過氧基,以及新的氧自由基等。脂質(zhì)過氧化作用不僅把活性氧轉(zhuǎn)化成活性化學(xué)劑,即非自由基性的脂類分解產(chǎn)物,而且通過鏈?zhǔn)交蜴準(zhǔn)街ф湻磻?yīng),放大活性氧的作用。因此,初始的一個活性氧能導(dǎo)致很多脂類分解產(chǎn)物的形成,這些分解產(chǎn)物中,一些是無害的,另一些則能引起細(xì)胞代謝及功能障礙,甚至死亡。氧自由基不但通過生物膜中多不飽和脂肪酸的過氧化引起細(xì)胞損傷,而且還能通過脂氫過氧化物的分解產(chǎn)物引起細(xì)胞損傷。因而測試 MDA的量常?煞从硻C(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度,間接地反映出細(xì)胞損傷的程度。MDA的測定常常與SOD的測定相互配合,SOD活力的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基的能力,而MDA的高低又間接反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度,通過SOD與MDA的結(jié)果分析有助于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、藥理及工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展。
產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下:
1、操作簡便:可將試劑混合成單試劑操作,全程約50分鐘,可測100例左右樣本2、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放12個月有效,試劑配制后至少能存放6個月;呈色穩(wěn)定,顯色后24小時(shí)吸光度不變。
3、再現(xiàn)性好:批內(nèi)CV=2.3%,批間CV=5.34%。
4、回收試驗(yàn): X =101.8%。
5、受外界影響因素小:干擾因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
6、測試面廣:可測動物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)等,效果均佳。
所需儀器及自備試劑:
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀/半自動生化分析儀(比色測定波長為532nm)
2、恒溫水浴箱(孵育溫度為95℃以上)
3、臺式離心機(jī)
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理:
紅細(xì)胞:需用蒸餾水將紅細(xì)胞制備成溶血液(100倍溶血液)后測定。
動物組織樣本:可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液,離心取上清測定。
培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織:常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測定。
具體的樣本前處理:參考我們隨貨發(fā)送的《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》以及試劑盒中詳細(xì)說明書。
操作流程:
1、按步驟加入樣本和試劑
2、漩渦混勻,95℃以上沸水浴40分鐘,流水冷卻,然后3500~4000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,取上清待測
3、532nm波長,1cm光徑,比色測定各管吸光度值
注:取樣量一般為0.1~0.2ml(樣本量夠直接取0.2ml測定)