蛋白質(zhì)羰基在體內(nèi)的形成主要是通過(guò)金屬離子催化氧化系統(tǒng)完成的。在這個(gè)過(guò)程中,F(xiàn)e2+和 Cu2+可以結(jié)合在蛋白質(zhì)的陽(yáng)離子結(jié)合位點(diǎn)。被H2O2或超氧陰離子攻擊之后將側(cè)鏈含有氨基酸羰基化。此外,羥自由基也可直接作用于肽鏈,使肽鏈斷裂,引 起蛋白質(zhì)一起結(jié)構(gòu)的破壞,在斷裂處產(chǎn)生羰基。羰基化蛋白極易相互交聯(lián)、聚集為大分子從而降低或失去原有蛋白質(zhì)的功能,后者又可加重細(xì)胞內(nèi)蛋白水解酶的負(fù) 擔(dān),最終導(dǎo)致疾病。
本試劑盒可廣泛應(yīng)用于各種疾病如衰老、動(dòng)脈硬化癥,糖尿病和帕金森綜合癥、風(fēng)濕
性關(guān)節(jié)炎等疾病的早期診斷,抗氧化保健食品、抗氧化藥物和化妝品等的評(píng)價(jià),還可以用于評(píng)價(jià)由于一些環(huán)境有害因子如輻射、化學(xué)毒物等對(duì)機(jī)體造成的氧化損傷。
產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:全程約2小時(shí),可測(cè)50例左右樣本。
2、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
3、回收試驗(yàn): X =101%。
4、受外界影響因素。焊蓴_因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
5、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血清(漿)、組織等。
所需儀器及自備試劑:
1、紫外分光光度計(jì)(比色測(cè)定波長(zhǎng)為370nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)
3、高速冷凍臺(tái)式離心機(jī)
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理:
血清(漿)可直接測(cè)定。
動(dòng)物組織:可用特殊勻漿介質(zhì)(R1)按重量體積比制備成組織勻漿液,離心取上清測(cè)定。
具體的樣本前處理:參考我們隨貨發(fā)送的《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》以及試劑盒中詳細(xì)說(shuō)明書(shū)。
操作流程:
1、組織樣本按說(shuō)明進(jìn)行前處理最終取上清液100ul,血清樣本直接取樣100ul,加R3、R4抽提 1分鐘,37℃避光反應(yīng)30分鐘
2、組織樣本按說(shuō)明進(jìn)行前處理最終取上清液100ul,血清
3、加無(wú)水乙醇乙酸乙酯混合應(yīng)用液,抽提1分鐘, 12000r/min離心10min,棄上清液,留沉淀,如此重復(fù)4次
4、加R6,37℃水浴15分鐘,12000r/min離心15min,取上清液在370nm處(紫外),0.5cm光徑比色皿,測(cè)定OD