測定意義:
檸檬酸合成酶,即Citrate synthase,又稱檸檬酸縮合酶,在三羧酸循環(huán)(又稱檸檬酸循環(huán))中有非常重要的作用,因為它催化的反應(yīng)是關(guān)鍵步驟。而三羧酸循環(huán)是需氧生物體內(nèi)普遍存在的代謝途徑,是三大營養(yǎng)素糖類、脂類、氨基酸代謝聯(lián)系的樞紐和最終代謝通路。
三羧酸循環(huán)(英語:Tricarboxylic acid cycle;TCA cycle),或檸檬酸循環(huán)(Citric acid cycle)或克雷伯氏循環(huán)(Krebs Cycle),是需氧生物體內(nèi)普遍存在的代謝途徑,因為在這個循環(huán)中幾個主要的中間代謝物是含有三個羧基的檸檬酸,因此得名;或者以發(fā)現(xiàn)者漢斯·阿道夫·克雷伯命名為克雷伯氏循環(huán),簡稱克氏循環(huán)(Krebs cycle)。三羧酸循環(huán)是三大營養(yǎng)素(糖類、脂類、氨基酸)的最終代謝通路,又是糖類、脂類、氨基酸代謝聯(lián)系的樞紐。
在三羧酸循環(huán)中,反應(yīng)物葡萄糖或者脂肪酸會變成乙酰輔酶A。這種“活化醋酸”(一分子輔酶和一個乙;相連),會在循環(huán)中分解生成最終產(chǎn)物二氧化碳并脫氫,質(zhì)子將傳遞給輔酶煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)和黃素腺嘌呤(FAD),使之成為NADH + H+和FADH2。NADH + H+和FADH2會繼續(xù)在呼吸鏈中被氧化成NAD+和FAD,并生成水。這種受調(diào)節(jié)的“燃燒”會生成ATP,提供能量。
真核生物的線粒體和原核生物的細(xì)胞質(zhì)是三羧酸循環(huán)的場所。它是呼吸作用過程中的一步,但在需氧型生物中,它先于呼吸鏈發(fā)生。厭氧型生物則首先遵循同樣的途徑分解高能有機(jī)化合物,例如糖酵解,但之后并不進(jìn)行三羧酸循環(huán),而是進(jìn)行不需要氧氣參與的發(fā)酵過程。
在三酸酸循環(huán)第一步反應(yīng)中,催化乙酰輔酶A的乙基與草酰乙酸的酮基結(jié)合生成檸檬酰輔酶A,以便后續(xù)高能硫酸鍵水解,釋放出輔酶A,得到檸檬酸。檸檬酸合成酶是一個調(diào)控酶,此酶的底物乙酰輔酶A和草酰乙酸是它的激活劑,NADH、琥珀酰輔酶A是抑制劑。
檢測原理:
技術(shù)特點:
(1) 使用可見光分光光度計或酶標(biāo)儀檢測(412nm),適用性高;
(2) 三試劑設(shè)計,免除繁瑣操作;
(3) 可測定動物血清或組織樣品;
(4) 此方法靈敏度高,僅需微量樣品即可測定。
(5) 原理同國際接軌,處于領(lǐng)先水平。