- 介紹： 基 因 型F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15Δ lacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG簡 要 說 明TOP10菌株來源于MC1061菌株， 是目前實(shí)驗(yàn)室最常用的感受態(tài)細(xì)胞之一，基因型與DH10B高度類似（DH10B為galE15型，而TOP10為galU型）。TOP10生長速度快（比DH5α快，但比Mach1-T1生長速度慢），10小時可見克隆， recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。可用于構(gòu)建克隆，藍(lán)白斑篩選等實(shí)驗(yàn)，具有鏈霉素抗性。High5TM系列TOP10感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>108cfu/μg。
- 操 作 說 明
- 1.TOP10感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時迅速插入冰中），加入目 的DNA（質(zhì)�；蜻B接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。
- 2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
- 3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
- 4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
- 5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少13h。
- 注 意 事 項
- 1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化，融化后8分鐘內(nèi)加入質(zhì)粒，否則會影響轉(zhuǎn)化效率。
- 2.混入質(zhì)�；蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。
- 3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)�；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
- 儲存條件： -80℃
- 用途： 克隆感受態(tài)細(xì)胞
- 注意：部分產(chǎn)品我司僅能提供部分信息，我司不保證所提供信息的權(quán)威性，僅供客戶參考交流研究之用。
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