- 介紹: 基 因 型rpsL (Str R) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacIqlacZΔM15]
- 簡 要 說 明
- JM110菌株具有硫酸鏈霉素抗性(StrR) ;是甲基化基因dam、dcm 缺失的菌株,提取得到的質粒DNA,可被對dam、dcm甲基化敏感的內切酶切割; lacIqlacZΔM15的存在使JM110可以進行藍白斑篩選,但轉化效率不高,High5TM系列JM110感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作,經(jīng)pUC19 質粒檢測轉化效率約107 cfu/μg。一般不用于質粒構建,只適用于質粒轉化。
- 操 作 說 明
- 1.JM110感受態(tài)細胞放置冰中融化(或放手心或室溫片刻,待菌體處于冰水混合狀態(tài)時迅速插入冰中),加入目的DNA并用手撥打EP管底輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。
- 2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
- 3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
- 4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
- 5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
- 注 意 事 項
- 1. 感受態(tài)細胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化,融化后不可久放,八分鐘內加入質粒,否則會影響轉化效率。
- 2.混入質粒時應輕柔操作。
- 3.轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。
- 儲存條件: -80℃
- 用途: 克隆感受態(tài)細胞
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