包裝:5ml(可用于50張片子)
適用:一抗來源于小鼠或兔子
顯色底物:DAB (聯(lián)苯二胺)
試劑組成:
組分編號 | 組分名稱 | 規(guī)格 | 數(shù)量 |
A | 過氧化氫 | 5ml | 1 |
B | 超級封閉液 | 5ml | 1 |
C | 一抗放大劑 | 5ml | 1 |
D | 酶標二抗聚合物 | 5ml | 1 |
E | DAB A液 | 5ml | 1 |
F | DAB B液 | 160ul | 1 |
未提供但必需試劑:一抗(來源于小鼠或兔子)、PBS (磷酸鹽緩沖液)
本試劑盒是基于聚合物技術的最新一代免疫組化二抗非生物素檢測系統(tǒng),信號更強、操作更加簡單。 與傳統(tǒng)的免疫組化二抗試劑盒相比,具有3個特點:一是由于聚合物的獨到之處,使得酶分子與二抗IgG分子直接結合形成的多聚物分子高度敏感性,有效減少了一抗使用量,一抗試劑可再稀釋2-4倍;二是由于避免了生物素的使用,從而可以避免由于生物素引起的非特異性背景顯色,得到更清晰的顯色和更干凈的背景;三是快速,更短的試劑孵育時間。
儲存及有效期
2-8°C保存。每個組分至少可以保存18個月。
操作步驟:
說明:所有的步驟在室溫下操作,加試劑可以直接滴瓶滴定,也可以用移液器,一滴=30-40ul
1. 脫蠟、水化組織切片
2. PBS洗2-3次各5分鐘
3. 根據(jù)所應用的一抗的特殊要求,對組織切片進行預處理
4. PBS洗2-3次各5分鐘
5. 加入100ul A 液孵育十分鐘,阻斷內源性過氧化物酶,以減少非特異性背景染色
6. PBS洗2-3次各5分鐘
7. 加入100ul B 液孵育五分鐘來減少非特異性染色。注意:此步驟不要超過十分鐘;如果一抗在含有5%至10%正常山羊血清的緩沖液中稀釋,則此步驟可以省略
8. PBS洗2-3次各5分鐘
9. 加一抗,室溫或37℃孵育20分鐘
10. PBS洗2-3次各5分鐘
11. 加入100ul C 液孵育十分鐘
12. PBS洗2-3次各5分鐘
13. 加入100ul D 液孵育十分鐘.注意:此液對光敏感,注意避光
14. PBS洗2-3次各5分鐘
15. 配制新鮮底物液:將30ul的 F 液和1ml的 E 液充分混合,即配制成新鮮底物液(該底物液可存放2周)
16. 加入100ul新鮮底物液, 孵育五分鐘
17. 去離子水沖洗
18. 復染,封片