本試劑盒采用特制的進(jìn)口DNA吸附柱和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)，特別適合于從口腔咽拭子中分離純化基因組DNA。各種來源樣品裂解消化處理后DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜（特別配備了Carrier RNA可以從體系中輕松捕獲微量核酸）,再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，將鹽、細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈的基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。純化后的DNA無雜質(zhì)和PCR抑制劑，可直接適用于PCR分析。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1、配備了Carrier RNA 用于充分收集特別微量DNA。
2、提取的DNA純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，可適用于各種常規(guī)操作，包括PCR、酶切、測(cè)序、Southern 雜交等。
自備試劑：無水乙醇
產(chǎn)品信息：
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1、配備了Carrier RNA 用于充分收集特別微量DNA。
2、提取的DNA純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，可適用于各種常規(guī)操作，包括PCR、酶切、測(cè)序、Southern 雜交等。
自備試劑：無水乙醇
產(chǎn)品信息：
| 組分 | 保存 | 50次 |
| 裂解液 ML | 室溫 | 20ml |
| 結(jié)合液 CB | 室溫 | 20ml |
| 抑制物去除液 IR | 室溫 | 25ml |
| 漂洗液 WB | 室溫 | 15ml（第一次使用前加入 60ml 無水乙醇） |
| Carrier RNA | -20℃ | 50ul |
| 洗脫緩沖液 EB | 室溫 | 10ml |
| 蛋白酶 K（20mg/ml） | 室溫 | 1ml |
| 吸附柱 AC | 室溫 | 50個(gè) |
| 收集管 | 室溫 | 50個(gè) |
使用方法
提示：第一次使用前請(qǐng)先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 無水乙醇，充分混勻， 加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入! 取樣：取一根醫(yī)用消毒棉簽（手不要碰觸脫脂棉部位），伸進(jìn)口腔，緊靠臉頰內(nèi)側(cè)來回 刮拭 20 次（不時(shí)旋轉(zhuǎn)棉棒），需充分接觸口腔粘膜。 注意：避免用手觸及棉簽，采集前可先用清水輕輕漱口。為防止樣本被食物或者飲料 污染，取樣前 30 min 內(nèi)應(yīng)該避免進(jìn)食或者飲水。
操作： 1、用剪刀將棉簽部分從其桿上剪下，放入 2ml 離心管中，加入 400μl 裂解液 ML。
2、再加入 20μl 的蛋白酶 K (20mg/ml)溶液，立刻渦旋振蕩充分混勻，56℃放置 30 min， 期間每 10 min 渦旋混勻 10 sec。
3、加入 400μl 結(jié)合液 CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，70℃放置 10 min（擠壓去除拭子， 將盡可能多的裂解液轉(zhuǎn)移至新的離心管中）。 如果拭子上細(xì)胞數(shù)量少，導(dǎo)致提取的基因組 DNA 產(chǎn)量過低, 可以在 400μl 結(jié)合液 CB 中加入 1μl Carrier RNA 儲(chǔ)存溶液。
4、冷卻后加 200μl 無水乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻。簡(jiǎn)短離心以除去管蓋內(nèi)壁的液 滴，收集所有的液體到管底。（如果周圍環(huán)境高于 25℃,乙醇需要冰上預(yù)冷后再加入）
5、將上一步混合物中加入一個(gè)吸附柱 AC 中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm 離心 30-60 sec，倒掉收集管中的廢液。
6、加入 500μl 抑制物去除液 IR，12,000rpm 離心 30 sec，棄廢液。
7、加入 500μl 漂洗液 WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心 30 sec， 棄掉廢液。
8、重復(fù)操作步驟 7。
9、將吸附柱 AC 放回空收集管中，12,000rpm 離心 2 min，將吸附柱置于室溫放置數(shù)分 鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
10、取出吸附柱 AC，放入一個(gè)干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加 20-50μl 洗脫緩 沖液 EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好），室溫放置 1 min， 12,000rpm 離心 1 min。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置 1 min， 12,000rpm 離 心 1 min 。 洗 脫 體 積 越 大 ， 洗 脫 效 率 越 高 ， 如 果 需 要 DNA 濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積，但是最小體積不應(yīng)少于 20μl，體積過 小降低 DNA 洗脫效率，減少 DNA 產(chǎn)量。（注意:DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解） 注意：DNA 濃度及純度檢測(cè) 得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過程中的剪切力等因素有 關(guān)�；厥盏玫降� DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。 DNA 應(yīng)在 OD260 處有顯著吸收峰，OD260 值為 1 相當(dāng)于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、 40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為 1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而 使用滅菌水比值會(huì)偏低，因?yàn)?pH 值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低
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