細(xì)胞名稱
23132/87（人胃癌細(xì)胞）
別名
23132/87
生長特性
貼壁上皮細(xì)胞融合生長
傳代方法
1:2傳代
生長方式
不適用
培 養(yǎng) 基
RPMI1640+10%FBS
培養(yǎng)體系
溫度：37℃ ， 氣相：95%空氣 ，5%CO2
細(xì)胞背景
1987年從一位72歲的胃腺癌患者的原發(fā)腫瘤中建立
凍存條件
完全培養(yǎng)基50%+40%FBS+10%DMSO，液氮
物種：人類（智人）
組織：胃
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支原體：用環(huán)丙沙星（Ciprobay）消除污染，然后用DAPI、微生物培養(yǎng)、RNA雜交檢測呈陰性
免疫學(xué)：細(xì)胞角蛋白+，細(xì)胞角蛋白-7+，細(xì)胞角蛋白-8+，細(xì)胞角蛋白-17+，細(xì)胞角蛋白-18+，細(xì)胞角蛋白-19+，結(jié)蛋白-，內(nèi)皮細(xì)胞-，EpCAM+，GFAP-，神經(jīng)絲-，波形蛋白-；（最初的數(shù)據(jù)顯示陰性，我們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞角蛋白-7）
指紋圖譜：小衛(wèi)星標(biāo)記的多重PCR顯示了一個獨特的DNA圖譜
物種：經(jīng)AST、MDH等IEF鑒定為人類
細(xì)胞遺傳學(xué)：具有12%多倍體的人類超四倍體核型-47（45-52）<2n>XY，+20，t（1；15）（p11；p11），t（6；12）（p21；q21），i（13q），t（13；14）（p10；q10）-與已發(fā)表的核型非常相似
病毒ELISA：逆轉(zhuǎn)錄酶陰性；PCR：EBV-、HBV-、HCV-、HHV-8-、HIV-1-、HIV-2-、HTLV-I/II-、MLV-、SMRV-
細(xì)胞收到后處理：
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運輸?shù)淖詈棉k法。收到細(xì)胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松）
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
