正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
土壤蔗糖酶(S-SC)測(cè)試盒測(cè)定意義:
S-SC能夠水解蔗糖變成相應(yīng)的單糖而被機(jī)體吸收,其酶促作用產(chǎn)物與土壤中有機(jī)質(zhì)、氮、磷含量,微生物數(shù)量及土壤呼吸強(qiáng)度密切關(guān),是評(píng)價(jià)土壤肥力的重要指標(biāo)。
測(cè)定原理:
S-SC催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng),生成棕紅色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范圍內(nèi)510nm光吸收增加速率與S-SC活性成正比。
自備用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:甲苯5mL×1 瓶,4℃保存;(自備)
試劑二:液體15mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前每瓶加入40mL蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體30mL×1 瓶,4℃保存。
測(cè)定步驟和加樣表:
試劑名稱 | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
風(fēng)干土樣(g) | 0.1 | 0.1 |
試劑一(μL) | 15 | 15 |
振蕩混勻,使土樣全部濕潤,37℃水浴 15min | ||
試劑二(μL) | 250 | 250 |
試劑三(μL) | 750 |
|
蒸餾水(μL) |
| 750 |
充分混勻,放入 37℃水浴培養(yǎng) 24 小時(shí),10000 g,4℃,離心 5min,取上清液 | ||
上清液(μL) | 200 | 200 |
試劑四(μL) | 500 | 500 |
充分混勻,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻后充分混勻,蒸餾水稀釋10倍后(可以吸取100μL,加入900μL 蒸餾水稀釋;如果吸光度大于4,可以適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)),510nm處蒸餾水調(diào)零,讀吸光值 A。計(jì)算 ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
S-SC 活性計(jì)算:
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y = 4.9x -0.062;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值。
單位的定義:每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個(gè) S-SC 活力單位。
S-SC 活力(mg/d/g 土樣)=( ΔA+0.062) ÷4.9×10×V 反總÷W÷T =20.7×(ΔA+0.062)
10:稀釋倍數(shù);T:反應(yīng)時(shí)間,1d;V 反總:反應(yīng)體系總體積:1.015mL;W:樣本質(zhì)量,0.1g。