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土壤過氧化氫酶(Solid-Catalase)試劑盒

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 注意:正式測(cè)定前務(wù)必取2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

土壤過氧化氫酶(Solid-Catalase,S-CAT)試劑盒產(chǎn)品內(nèi)容:

試劑一:液體×1 瓶,4保存;臨用前加入29.7mL 蒸餾水充分溶解后待用;用不完的試劑4保存;

試劑二:粉劑×1 瓶,4保存;臨用前加入1mL 蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4保存;

試劑三:液體×1 瓶,4保存。

產(chǎn)品說明:

S-CAT是土壤微生物代謝的重要酶類,在H2O2 清除系統(tǒng)中具有重要作用。

H2O2 240nm下有特征吸收峰,通過測(cè)定與土壤反應(yīng)后溶液在此波長(zhǎng)下吸光度的變化,即可反應(yīng)S-CAT 活性的高低。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板(UV板)和蒸餾水

操作步驟:

一、樣品處理:

新鮮土樣自然風(fēng)干或37 度烘箱風(fēng)干,過30~50 目篩。

二、測(cè)定步驟:

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至240nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 加樣表

試劑名稱

測(cè)定管

無基質(zhì)管

無土管

風(fēng)干土樣(g

0.03

0.03

 

試劑一(μL

260

 

260

雙蒸水(μL

 

260

 

25振蕩培養(yǎng) 20min

試劑二(μL

10

10

10

混勻8000g25離心5min,取全部上清

試劑三(μL

30

30

30

混勻,取200uL 至微量石英比色皿或96 孔板中,240nm 處記錄各管吸光值A。

注意:每個(gè)測(cè)定管要設(shè)一個(gè)無基質(zhì)管,無土管只要做一管。三、S-CAT 活性計(jì)算:

A、用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

單位的定義:每天每g 風(fēng)干土樣催化1μmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

計(jì)算公式:S-CATμmol/d/g)=[(A 無土管-A 測(cè)定管+A 無基質(zhì)管)×V 反總÷ε×d×106]÷W÷T=16.5×A 無土管-A 測(cè)定管+A 無基質(zhì)管)

V 反總:反應(yīng)體系總體積,3×10-4 L;ε:過氧化氫摩爾消光系數(shù),4.36×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm; T:反應(yīng)時(shí)間,20 min=1/72d; W:樣本質(zhì)量,0.03g。

B、用96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

單位的定義:每天每g 風(fēng)干土樣催化1μmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

計(jì)算公式:S-CATμmol/d/g)=[(A 無土管-A 測(cè)定管+A 無基質(zhì)管)×V 反總÷ε×d×106]÷W÷T=33×A 無土管-A 測(cè)定管+A 無基質(zhì)管)

V 反總:反應(yīng)體系總體積,3×10-4 Lε:過氧化氫摩爾消光系數(shù),4.36×104 L / mol /cmd96 孔板光徑,0.5cm; T:反應(yīng)時(shí)間,20 min=1/72d; W:樣品質(zhì)量,0.03g。

 

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