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土壤β-葡萄糖苷酶(Solid-β-Glucosidase,S-β-GC) 試劑盒

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 測定意義:                           

土壤β-葡萄糖苷酶(Solid-β-Glucosidase,S-β-GC) 試劑盒S-β-GC能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團之間的糖苷鍵生成葡萄糖,是纖維素分解酶系中重要組成成分之一,在土壤微生物的糖類代謝方面具有重要生理功能。

測定原理:

S-β-GC能夠催化對-硝基苯-β-D吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者400n有特征光吸收。

自備用品

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。

試劑組成和配制

試劑一甲苯5mL×1瓶,4℃保存;(自備)

試劑粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入13mL蒸餾水,充分溶解備用,用不完的試劑仍-20℃保存;

試劑三:液體20mL×1瓶,4℃保存; 

試劑:液體15mL×1瓶,4℃保存; 

測定步驟:

1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至400nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 加樣表

試劑名稱

測定管

對照管

風(fēng)干土樣(g)

0.02

0.02

試劑一(μL)

10

10

振蕩混勻,使土樣全部濕潤,室溫放置15min

試劑二(μL)

130

 

試劑三(μL)

160

160

混勻, 37℃水浴1h,立即沸水浴煮沸5min(蓋緊,防止水分散失)流水冷卻

試劑二(μL)    

 

130

充分混勻,10000g常溫離心10min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列試劑)

上清液(μL)

70

70

試劑四(μL)

130

130

充分混勻,室溫靜置2min后, 400nm處測定吸光值A(chǔ),計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。

S-β-GC活力計算:

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y=0.0032x-0.0027;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/L),y為吸光值。

單位的定義:每天g土樣中產(chǎn)生1 μmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

S-β-GC活力(U/g 土樣)= (ΔA+0.0027)÷0.0032×V反總÷W÷T =112.5×(ΔA+0.0027)

T:反應(yīng)時間,1h=1/24d; V反總:反應(yīng)體系總體積3×10-4 L;W:樣質(zhì)量,0.02g。

b.用96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y=0.0016x-0.0027;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/L),y為吸光值。

單位的定義:每天g土樣中產(chǎn)生1 μmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

S-β-GC活力(U /g 土樣)= (ΔA+0.0027) ÷0.0016×V反總÷W÷T =225×(ΔA+0.0027)

T:反應(yīng)時間,1h=1/24d; V反總:反應(yīng)體系總體積3×10-4 L;W:樣質(zhì)量,0.02g。

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