正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
土壤多酚氧化酶(Solid-Polyphenol oxidase,S-PPO)試劑盒測定意義:
S-PPO 主要來源于土壤微生物、植物根系分泌物及動植物殘體分解釋放,催化土壤中芳香族化合物氧化成醌,醌與土壤中蛋白質、氨基酸、糖類、礦物等物質反應生成有機質和色素,
完成土壤芳香族化合物循環(huán),用于土壤環(huán)境修復。
測定原理:
S-PPO 能夠催化鄰苯三酚產生有色物質,后者在430nm有特征光吸收。
自備用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、乙醚 50mL(不允許快遞)、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:粉劑×1 瓶,臨用前加入 12mL 蒸餾水,用不完的試劑仍 4℃保存;
試劑二:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:乙醚 50mL×1 瓶,4℃保存;(自備)
測定步驟:
1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,調節(jié)波長至 430nm,蒸餾水調零。
2、加樣表
試劑名稱 | 測定管 |
風干土樣(g) | 0.02 |
試劑一(μL) | 120 |
振蕩混勻,30℃恒溫培養(yǎng) 1 h | |
試劑二(μL) | 50 |
試劑三(μL) | 430 |
振蕩數(shù)次,室溫靜置30min,取200μL上層液于430nm處測定吸光值 A。
注意: 乙醚易揮發(fā),轉移至酶標板時建議一次性不要測定太多樣本。
S-PPO 活力計算
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y=8.97x-0.003;x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值 A。
單位的定義:每天每 g 土樣中產生 1mg 紫色沒食子素定義為一個酶活力單位。
S-PPO 活力(mg/d/g 土樣)=(A+0.003) ÷8.97×V 反總÷W÷T=80×(A+0.003)
T:反應時間,1h=1/24d; V 反總:反應體系總體積 0.6mL;W:樣本質量,0.02g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y=4.485x-0.003;x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值 A。
單位的定義:每天每g土樣中產生1mg紫色沒食子素定義為一個酶活力單位。
S-PPO 活力(mg/d/g 土樣)=(A+0.003) ÷4.485×V 反總÷W÷T=160×(A+0.003)
T:反應時間,1h=1/24d; V 反總:反應體系總體積 0.6mL;W:樣本質量,0.02g。