葡萄糖檢測試劑盒(Folin-Wu比色法)
一、產(chǎn)品簡介：
葡萄糖(Glucose, Dextrose,Glu)又稱玉米葡糖，簡稱葡糖，化學(xué)式C;H1zO6，分子里為180.16，是自然界分布最廣、最重要的一種單糖，屬于多羥基醛。用酶學(xué)方法測定葡萄糖是生化檢測中的常用方法，最常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法，上述酶學(xué)法特點是：1、靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度均高；2、使用溫和的反應(yīng)條件；3、操作簡便；4、適用于自動分析儀，測定葡萄糖亦可通過鄰甲苯胺法、苯胺法、聯(lián)苯胺法等實現(xiàn)。
雅吉生物葡萄糖檢測試劑盒(Folin-Wu比色法)檢測原理是葡萄糖在加熱的堿性環(huán)境中銅離子還原成氧化亞銅沉淀，后者使磷鉬酸還原成鉬藍，使溶液呈藍色，顏色深淺與葡萄糖含量成正比，其最高吸收峰為420nm，利用分光光度計測定樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值，通過公式可以計算出樣品的葡萄糖含量，可用于人或動物的血清、血漿、腦脊液、細(xì)胞、組織細(xì)胞培養(yǎng)基等樣本中的葡萄糖含量定量測定。
該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。
三、自備材料：
1、蒸餾水、PBS、生理鹽水
2、離心管
3、水浴鍋
4、分光光度計
四、操作步驟(僅供參考)：
1、樣本處理：
①血清、血漿、腦脊液樣本：從待測樣本中分離出的血清或血漿不應(yīng)有溶血，一般需要去除。蛋白質(zhì)(即為無蛋白血濾液)后再經(jīng)檢測。取抗凝血1ml，加入7ml蒸餾水和1ml蛋白酸化液，混勻，緩慢加入1ml蛋白沉淀液，邊加邊搖勻，至出現(xiàn)暗紅色蛋白質(zhì)沉淀,靜置10min ,3000g離心5min，取上清液即為無蛋白血濾液，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>
②組織樣本：準(zhǔn)確稱取適量組織樣本，按質(zhì)量(g)：生理鹽水或PBS(ml)=1:9的比例，加入生理鹽水或PBS，冰浴條件下手動或機械勻漿，2500~3000g離心10min，取上清待用。
③細(xì)胞樣本：
a. 取適量的細(xì)胞(一般推薦>10以上)，1000g 離心10min，棄上清，留取沉淀。
b. 用PBS或生理鹽水清洗1~2次，1000g離心10min，棄上清，留取沉淀。
c. 加入200~300ul的PBS或生理鹽水勻漿，冰浴條件下超聲破碎細(xì)胞，功率300W，每次3~5s，間隔30s，重復(fù)3~5次;亦可手動勻漿，制備好的勻漿液不可離心;亦可用1~2% Triton X-100冰浴30~60min，制備好的裂解液不可離心。
2、制備Glu標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(0.55mmol/L )：取10ul Glu標(biāo)準(zhǔn)儲存液(55mmol/L)，補加蒸餾水或者無菌水990ul，充分混勻即可。根據(jù)需用量，臨用前按比例配置，不宜久存。
| 加入試劑(ml) | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測定管 |
| 蒸餾水 | 1.5 | 1 | 1 |
| Glu標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(0.55mmol/L) | - | 0.5 | - |
| 無蛋白血濾液或其他待測樣本 | - | - | 0.5 |
| Folin堿性銅溶液 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| Wu磷鉬酸溶液 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
3、Glu加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡，如果樣品中的Glu濃度過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進行測定。
充分混勻，置于沸水浴煮沸8min，取出，在冷水中冷卻，注意不能搖動，靜置10min,分別加入3.75ml蒸餾水。
4、Glu測定∶取不大于2ml上述溶液，以空白管調(diào)零，用分光光度計在420nm處讀取標(biāo)準(zhǔn)管和測定管的吸光度。
五、結(jié)果計算∶
葡萄糖含量(mmol/L)=(測定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度)×0.55×10
=(測定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度)×5.5
其中10為去蛋白樣品的稀釋倍數(shù)
六、注意事項:
1、待測樣本如不能及時測定，應(yīng)置于2~8℃保存，3天內(nèi)穩(wěn)定。
2、上述低溫試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降。
3、Glu標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液臨用前按比例配置，不宜久存。
4、如樣品吸光度值偏大，則需再次稀釋后重新檢測。
5、樣品中含有蛋白等干擾物質(zhì)時，須用去蛋白的方法處理后再行檢測。
6、煮沸時不能動搖，避免液體濺出。
七、 有效期∶6個月有效。4℃保存，4℃運輸。
