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pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc

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 pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc是自行研發(fā)的哺乳動物細胞表達質粒,用于表達C端帶有Myc標簽(EQKLISEEDL)的新冠病毒(SARS-CoV-2)毒膜(Membrane, M)蛋白,可以使用抗Myc標簽的抗體來識別M蛋白的表達,或進行免疫共沉淀分析等。該質粒含有CMV啟動子,可以高效啟動目的蛋白在細胞中的表達,質粒為氨芐青霉素抗性。

M蛋白是冠狀病毒四個結構蛋白之一,由M基因編碼,含有3個跨膜結構域和一個保守結構域。M蛋白是一種跨膜糖蛋白(membrane glycoprotein),大部分結構陷于膜內。M蛋白N-端親水性末端突出于膜的外表面,C-端親水區(qū)位于病毒粒子內部,能與病毒衣殼相互作用。M蛋白主要參與病毒組裝,促進膜彎曲(curvature)以及結合至核衣殼(nucleocapsid)上。M蛋白的保守結構域對于病毒裝配非常重要,主要通過M-M、M-S和M-N蛋白相互作用,參與病毒復制裝配和出芽。此外,SARS-CoV M蛋白還能抑制I型干擾素的產生。

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc質粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 232-819
T7 promoter and T7 primer binding site 863-882
Multiple cloning site 895-922
M protein 923-1589
Myc-tag 1589-1618
BGH pA 1665-1889
f1 origin of ss-DNA replication 1935-2363
SV40 promoter 2368-2711
Neomycin resistance ORF 2773-3567
SV40 polyA signal 3741-3871
pUC origin 4254-4924
Ampicillin resistance ORF 5069-6065
bla promoter 5964-5970

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc質粒(6065bp)的圖譜如下:

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc的多克隆位點的詳細圖譜見說明書:

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc)包括:

AfeI AleI AscI AsiSI BaeI BamHI BbvCI
BmgBI BsgI BsmBI BspDI BspEI BstEII BstXI
Bsu36I ClaI EcoNI EcoRI EcoRV Esp3I FseI
HpaI NotI PacI PmlI PshAI SacII SbfI
SfiI SrfI SwaI XcmI      

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc)包括:

Acc65I G`GTAC,C 917 NdeI CA`TA,TG 1161
AflII C`TTAA,G 908 NheI G`CTAG,C 1279
AgeI A`CCGG,T 1151 NruI TCG|CGA 1319
AhdI GACNN,N`NNGTC 5142 PaeR7I C`TCGA,G 1420
ApaI G,GGCC`C 1638 PciI A`CATG,T 1420
AvrII C`CTAG,G 2691 PflFI GACN`N,NGTC 1500
BcgI ,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` 5647 PflMI CCAN,NNN`NTGG 1656
BglII A`GATC,T 12 PluTI G,GCGC`C 484
BlpI GC`TNA,GC 1199 PpuMI RG`GWC,CY 895
BmtI G,CTAG`C 899 PspOMI G`GGCC,C 208
Bpu10I CC`TNA,GC 180 PspXI VC`TCGA,GB 1622
BsaBI GATNN|NNATC 2760 PstI C,TGCA`G 2954
BseRI GAGGAG(N)8,NN` 2687 PvuI CG,AT`CG 5512
BsiWI C`GTAC,G 1235 RsrII CG`GWC,CG 3417
BsmI GAATG,CN` 3821 SacI G,AGCT`C 818
BsrGI T`GTAC,A 1582 ScaI AGT|ACT 5622
BssHII G`CGCG,C 3298 SexAI A`CCWGG,T 2458
BstBI TT`CG,AA 3583 SfoI GGC|GCC 2902
BstZ17I GTA|TAC 3873 SgrAI CR`CCGG,YG 1151
CspCI ,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` 626 SmaI CCC|GGG 2714
DraIII CAC,NNN`GTG 2168 SnaBI TAC|GTA 590
EagI C`GGCC,G 2807 SpeI A`CTAG,T 249
Eco53kI GAG|CTC 816 StuI AGG|CCT 2690
HindIII A`AGCT,T 911 TspMI C`CCGG,G 2712
KasI G`GCGC,C 2900 Tth111I GACN`N,NGTC 3019
KpnI G,GTAC`C 921 XhoI C`TCGA,G 1622
MfeI C`AATT,G 161 XmaI C`CCGG,G 2712
NarI GG`CG,CC 2901      

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc質粒中推薦使用的測序引物序列如下:

pcDNA3.1 primer (829-848): 5'- CTAGAGAACCCACTGCTTAC -3'

BGH pA primer (1659-1676): 5'- TAGAAGGCACAGTCGAGG -3'

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc的全序列信息

包裝清單:
產品編號 產品名稱 包裝
D2941-1μg pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc 1μg
D2941-100μg pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc 100μg
說明書 1份
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-20℃保存。

注意事項:

本質粒未經(jīng)書面許可不得用于任何商業(yè)用途,也不得移交給訂貨人所在實驗室外的任何個人或單位。

本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。

為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明:
1. 首次使用1μg包裝的本產品時,請先取少量本質粒轉化大腸桿菌,進行質粒小量、中量或大量抽提后再用于后續(xù)用途。抽提獲得的質?梢酝ㄟ^酶切電泳進行鑒定,或通過測序進行鑒定。
2. 100μg包裝的本產品質粒濃度為0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者轉染細胞。

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