1.根據(jù)腺病毒 Hexon 基因，設(shè)計(jì)的針對(duì)腺病毒的 PCR 引物，克服了其他病毒 的干擾。
2.即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。
3.熒光定量 PCR 檢測(cè)，反應(yīng)特異性強(qiáng)。
4.本試劑盒足夠 100 次 20uL 體系的 qPCR 反應(yīng)。
5.本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
| 成分 | 編號(hào) | 十孔盒包裝(去紙托 |
| 2×qPCR Mix | 90408 | 1.0 mL（A 袋包裝） |
| Hexon 基因?qū)Ｒ恍砸?/span> A | yw1462 | 1 OD（A 袋包裝） |
| Hexon 基因?qū)Ｒ恍砸?/span> B | yw1463 | 1 OD（A 袋包裝） |
| 超純水 | 100935 | 1 mL×2（A 袋包裝 |
| Hexon 基因陽性對(duì)照 (10E9 copy/μL) | yw14641465 | 50 μL（B 袋包裝） |
| 使用手冊(cè) | 14-35700sc | 1 份 |
低溫運(yùn)輸、-20℃保存(B 袋的陽性對(duì)照一定要放擴(kuò)增區(qū)，A 袋的其余試劑放樣品
準(zhǔn)備區(qū))，有效期一年
一、樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化腺病毒樣品的 DNA，也可以另購本公司的柱式病毒 DNAout 或一管式病毒 DNAout，此產(chǎn)品跟本試劑盒兼容。
二、引物的制備（在樣品制備室進(jìn)行）
2.按引物標(biāo)簽提示在裝引物干粉的管中直接加入適量的超純水（加入量見引物 試管上的標(biāo)簽），使得兩條引物的濃度均為 10 uM（10 pmol/uL）。 三、稀釋陽性對(duì)照（以 10E3-10E8 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度 非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試 劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活
體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的長度為 139bp 的 DNA 片段作為陽性
對(duì)照。
3.標(biāo)記 5 個(gè)離心管，分別為 8，7，6，5，4，3 號(hào)。
4.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（最好用帶芯槍頭，下同）。
5.在 8 號(hào)管中加入 5 μL 10E9 拷貝/μL 的腺病毒 Hexon 基因陽性對(duì)照(試劑 盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
6.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 10E8 拷貝/μL 的腺病毒 Hexon 基因陽性對(duì)照(上步 稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7.在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的腺病毒 Hexon 基因陽性對(duì)照(上步 稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
8.換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
9.換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E4 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
10. 換槍頭，從 4 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 3 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E3 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
三、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（20 μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
11. 在 PCR 管中加入下列成分（待測(cè)樣品需要做三次重復(fù)，下表只列出一次。樣 品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照，并且陽性對(duì)照樣品要等所有成 分蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加）：
| 成分 | 樣品 | 陰性對(duì)照 | 陽性對(duì)照（3-8 管） |
| 2×qPCR Mix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| Hexon 基因專一性引物 A，10 uM | 1 μL | 1 μL | 各 1 μL |
| Hexon 基因專一性引物 B，10 uM | 1 μL | 1 μL | 各 1 μL |
| 自備 10×ROX (見注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 待測(cè)樣品 DNA 模板 | 1-5 μL | 不加 | 不加 |
|
陽性對(duì)照（3-8 號(hào)） |
不加 |
不加 | 各 5μL（3 號(hào)樣到 3 號(hào)管，4 號(hào)樣到 4 號(hào)管…） |
| 補(bǔ)水到 | 20 μL | 20 μL | 20 μL |
注:僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對(duì)照，其他熒光 PCR 儀器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、 RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX
12. 蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同
而自行優(yōu)化）。
13. 數(shù)據(jù)采集
具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合
DNA 時(shí)，最大吸收光譜在 471 nm，結(jié)合 DNA 時(shí)的最大吸收光譜在 500 nm，
最大發(fā)射光譜在 530 nm。
| 四、數(shù)據(jù)處理 |
| 14. 以 Hexon 基因序列陽性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo) |
| 準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品濃度的 log 為橫軸，以 Ct 值為縱軸，通過待測(cè)樣品的 |
| Ct 值計(jì)算出樣品 DNA 的濃度。 |
