鴨乙型肝炎病毒(DHBV)熒光定量PCR試劑盒(染料法)屬于禽嗜肝 DNA 病毒屬
（ Avihepadnavirus ） ， 此 屬 與 以 HBV 為代表的 正 嗜 肝 DNA 病 毒 屬
（Orthohepadnavirus）同屬于嗜肝 DNA 病毒科(Hepadnaviridae)。 DHBV 一直 作為研究 HBV、篩選和驗(yàn)證中西藥物抗病毒活性的動(dòng)物病毒模型，通過研究 DHBV 感 染鴨闡明了嗜肝 DNA 病毒的復(fù)制過程。在此研究中定量檢測 DHBV 具有重要的意義。 本產(chǎn)品就是根據(jù) DHBV 保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。本試劑盒 具有下列特點(diǎn)：
1.根據(jù) DHBV 的保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
2.靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個(gè)數(shù)量級，可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
3.即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染
| 成分 | 編號 | 十孔盒包裝（去紙托 |
| 2×qPCR MagicMix | 90408 | 500 μL（裝 A 袋） |
| 微量核酸稀釋液 （熒光 PCR 專用） | 121206 | 1 mL（裝 A 袋） |
| 鴨 HBV PCR 引物混合物 | 14-44200 （原 11-180803a） | 100 μL（裝 A 袋） |
| 鴨 HBV 基因陽性對照 (1×10E8 copy/μL) | 14-44200 （原 11-180803pc） | 50 μL（裝 B 袋） |
| DNA 病毒裂解液（試用裝） | 3674a | 15 次（9 mL） |
| 使用手冊 | 11-44200sc | 1 份 |
低溫運(yùn)輸、-20℃保存(A 袋試劑放樣品準(zhǔn)備區(qū)、B 袋的陽性對照最好分開放置)，有效期
一年。
DNA 模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）。
一、樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）
二、稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常
| 分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照， | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（最好用帶芯槍頭，下同）。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 5.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)， | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 6.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 7.換槍頭，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20 μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行） | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 9.在 PCR 管中加入下列成分（待測樣品需要做三次重復(fù)，下表只列出一次。樣品管 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 儲存好后最后加）：
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| （30 個(gè)循環(huán)） | 60℃ | 15 秒 |
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| 72℃ | 15 秒 |
| 11. 數(shù)據(jù)采集 |
| 具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合 DNA 時(shí)， |
| 最大吸收光譜在 471 nm，結(jié)合 DNA 時(shí)的最大吸收光譜在 500 nm，最大發(fā)射光 |
| 譜在 530 nm。 |
| 四、數(shù)據(jù)處理 |
| 12. 以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品 |
| 的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。 |
