DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)
將 DNA 導(dǎo)入細(xì)胞的方法很多，采用 DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染法主要優(yōu)點(diǎn)是相對(duì)簡(jiǎn)單、快速、同次試驗(yàn)內(nèi)和不同次實(shí)驗(yàn)間的重復(fù)性較好，該法尤其適用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。雅吉生物DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)采用特殊溶劑溶解，經(jīng)過(guò)濾除菌，臨用前 37℃保溫并充分混勻。
將 DNA 導(dǎo)入細(xì)胞的方法很多，采用 DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染法主要優(yōu)點(diǎn)是相對(duì)簡(jiǎn)單、快速、同次試驗(yàn)內(nèi)和不同次實(shí)驗(yàn)間的重復(fù)性較好，該法尤其適用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。雅吉生物DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)采用特殊溶劑溶解，經(jīng)過(guò)濾除菌，臨用前 37℃保溫并充分混勻。
產(chǎn)品組成： DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)10ml
操作步驟(僅供參考)：
1、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，制備成細(xì)胞懸液。將細(xì)胞密度調(diào)整到 5×10 個(gè)/ml 接種至 6 孔板。
2、培養(yǎng)12-24h用蒸餾水4或TE 將質(zhì)粒 DNA 稀釋至 0.1～1μg/μl，將 DNA 溶液直接加到轉(zhuǎn)染培養(yǎng)液至其終濃度為 1.0μg/ml。
3、將 DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)預(yù)熱至 37℃并顛倒混勻，加到 DNA/轉(zhuǎn)染培養(yǎng)液使DEAE-葡聚糖終濃度為 100μg/ml，最適濃度需要自行摸索。
4、將 50～70%匯片的細(xì)胞培養(yǎng)物中的培養(yǎng)液輕輕吸出，換上適合體積的 37℃的補(bǔ)充有DEAE-葡聚糖/DNA/轉(zhuǎn)染培養(yǎng)液，37℃孵育 4h。
5、倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)會(huì)出現(xiàn)顆粒，有的細(xì)胞核出現(xiàn)固縮，有的細(xì)胞邊緣出現(xiàn)部分破碎。有效的DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染常伴有25～75%的細(xì)胞死亡。
6、換用 100mmol/L 氯喹培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)：
1、 某些特點(diǎn)細(xì)胞需要較長(zhǎng)的轉(zhuǎn)染時(shí)間，因?yàn)槁揉屑?xì)胞毒性，可在轉(zhuǎn)染的最后時(shí)期加入。
2、 轉(zhuǎn)染時(shí)，搖動(dòng)細(xì)胞可保障轉(zhuǎn)染效率均一，最適轉(zhuǎn)染時(shí)間需通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定。
3、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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