單寧含量測試盒測定意義：
單寧是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的多元酚化合物，又稱植物多酚。具有獨特的化學(xué)性質(zhì)和多 種生理活性，如能與蛋白質(zhì)、生物堿、多糖結(jié)合；能與多種金屬離子發(fā)生絡(luò)合或靜電作用； 具有止血、抑制微生物、抗過敏、抗突變、抗腫瘤、抗衰老等生理活性。
測定原理：
單寧在堿性環(huán)境下與磷鉬酸反應(yīng)，生成藍色化合物，在 760nm 處有最大吸收峰。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體 4mL× 1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 3mL × 1 瓶，4℃保存；
單寧的提�。�
按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL
蒸餾水），充分勻漿后轉(zhuǎn)移到 EP 管中，80℃水浴提取 30min， 8000 g，25℃離心 10 min，
取上清液待測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 760nm 處，蒸餾水調(diào)零；試劑一和試
劑二 37℃預(yù)熱 10min 以上；
2、操作表：
試劑名稱（µL） 對照管 測定管
樣本 5
蒸餾水 135 130
試劑一 35 35
混勻，室溫靜置 5min
試劑二 30 30
混勻，室溫靜置 30min，760nm 處讀取吸光值 A，ΔA=A 測定-A 對照，對照管只要做一管。
單寧含量計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下：
1、標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.0132x - 0.0035；x 為標準品濃度(µg/mL)，y 為吸光
值。
2、按樣本鮮重計算：
單寧含量（µg /g 鮮重）= [(ΔA＋0.0035) ÷0.0132×V1]÷（W×V1÷V2）=75.76×(ΔA＋0.0035)
÷W。
3、按樣本蛋白濃度計算：
單寧含量(µg prot)= [(ΔA＋0.0035) ÷0.0132×V1]÷(V1×Cpr)=75.76×(ΔA＋0.0035) ÷Cpr。
V1：加入樣本體積，0.005mL；V2：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；
W：樣本鮮重，g。
b.用 96 孔板測定的計算公式如下：
1、標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.0066x - 0.0035；x 為標準品濃度（µg/mL），y 為吸光
值。
2、按樣本鮮重計算：
單寧含量(µg/g 鮮重)=[(ΔA＋0.0035)÷0.0066×V1]÷(W×V1÷V2)=151.52×(ΔA＋0.0035)
÷W。
3、按樣本蛋白濃度計算：
單寧含量(µg prot)= [(ΔA＋0.0035)÷0.0066×V1]÷(V1×Cpr)=151.52×(ΔA＋0.0035)÷Cpr。
V1：加入樣本體積，0.005mL；V2：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；
W：樣本鮮重，g。
注意：最低檢測限為 10μg /g 鮮重 或 0. 1μg prot
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體 4mL× 1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 3mL × 1 瓶，4℃保存；
單寧的提�。�
按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL
蒸餾水），充分勻漿后轉(zhuǎn)移到 EP 管中，80℃水浴提取 30min， 8000 g，25℃離心 10 min，
取上清液待測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 760nm 處，蒸餾水調(diào)零；試劑一和試
劑二 37℃預(yù)熱 10min 以上；
2、操作表：
試劑名稱（µL） 對照管 測定管
樣本 5
蒸餾水 135 130
試劑一 35 35
混勻，室溫靜置 5min
試劑二 30 30
混勻，室溫靜置 30min，760nm 處讀取吸光值 A，ΔA=A 測定-A 對照，對照管只要做一管。
單寧含量計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下：
1、標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.0132x - 0.0035；x 為標準品濃度(µg/mL)，y 為吸光
值。
2、按樣本鮮重計算：
單寧含量（µg /g 鮮重）= [(ΔA＋0.0035) ÷0.0132×V1]÷（W×V1÷V2）=75.76×(ΔA＋0.0035)
÷W。
3、按樣本蛋白濃度計算：
單寧含量(µg prot)= [(ΔA＋0.0035) ÷0.0132×V1]÷(V1×Cpr)=75.76×(ΔA＋0.0035) ÷Cpr。
V1：加入樣本體積，0.005mL；V2：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；
W：樣本鮮重，g。
b.用 96 孔板測定的計算公式如下：
1、標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.0066x - 0.0035；x 為標準品濃度（µg/mL），y 為吸光
值。
2、按樣本鮮重計算：
單寧含量(µg/g 鮮重)=[(ΔA＋0.0035)÷0.0066×V1]÷(W×V1÷V2)=151.52×(ΔA＋0.0035)
÷W。
3、按樣本蛋白濃度計算：
單寧含量(µg prot)= [(ΔA＋0.0035)÷0.0066×V1]÷(V1×Cpr)=151.52×(ΔA＋0.0035)÷Cpr。
V1：加入樣本體積，0.005mL；V2：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；
W：樣本鮮重，g。
注意：最低檢測限為 10μg /g 鮮重 或 0. 1μg prot
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