細胞詳述
神經干細胞是存在于哺乳動物體內的一種具有多向分化潛能和自我更新能力的細胞，能分化為神經元和神經膠質細胞，其在神經系統(tǒng)疾病中的替代治療前景廣闊。
細胞特性
1) 組織來源于人的正常腦組織。
2) 細胞鑒定：Nestin免疫熒光染色為陽性。
3) 經鑒定細胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式：集落，克隆球狀，半貼壁半懸浮培養(yǎng)。
產品的運輸和保存
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
產品使用
1)本產品僅能用于科研
2)本產品未通過直接用于活體動物和人的審核
3)本產品未通過用于活體診斷的審核
一、所需儀器：
離心機
生物安全柜
電動移液器
CO2培養(yǎng)箱
倒置顯微鏡
液氮罐
恒溫水浴鍋
-86℃超低溫冰箱
二、所需試劑：
胎牛血清（FBS）
無菌1×PBS pH=7.2
完全培養(yǎng)基
消化液：0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA
完全培養(yǎng)基（含血清）
細胞培養(yǎng)級DMSO
凍存液：80%FBS+20%DMSO
無菌1×PBS pH=7.2
消化液：0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA
異丙醇
三、所需耗材：
離心管（15ml、50ml）
T-25細胞培養(yǎng)瓶
一次性無菌移液管（2ml、5ml、10ml）
1.8ml凍存管
程序降溫盒
四、復蘇操作步驟：
1.將恒溫水浴鍋中的水預熱到37℃；
2.從液氮罐中取出要復蘇的細胞，盡快轉入恒溫水浴鍋中復溫，工程中需要不斷震蕩凍存管以提高復溫速率；
3.將融化了的凍存管中的用移液管轉入一直裝有5ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中，充分混勻后，300g離心5min；
離心完成后棄去上清，用1ml完全培養(yǎng)基重懸細胞后，轉入T-25細胞培養(yǎng)中，再加完全培養(yǎng)基4ml，之后轉入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。
五、傳代操作步驟：
1.將需要那傳代的細胞從CO2培養(yǎng)箱中取出，在生物安全柜內，打開培養(yǎng)瓶瓶口，吸棄瓶內的培養(yǎng)基；
2.向培養(yǎng)內加入無菌1×PBS 3ml，之后水平放置培養(yǎng)瓶，旋轉震蕩培養(yǎng)瓶，使PBS能夠浸潤到培養(yǎng)平面上所都的面積，吸棄PBS；
3.重復步驟2一次，之后向瓶內加入消化液1ml，輕微震蕩后放入37℃CO2培養(yǎng)箱中孵育2-4min；
4.孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，如還有部分細胞為消化下來，可在生物安全柜內用移液管吸起消化液，吹打培養(yǎng)平面；
5.向消化下細胞的培養(yǎng)瓶中加入1ml含血清的完全培養(yǎng)基終止消化，然后將培養(yǎng)瓶中的液體轉入15ml離心管中，300g離心5min；
6.離心完成后，棄上清，用2ml完全培養(yǎng)基重懸細胞，將重懸后的培養(yǎng)基轉入2個T-25培養(yǎng)瓶，每個培養(yǎng)瓶各1ml，再向每個培養(yǎng)瓶中各加入4ml完全培養(yǎng)基；
7.水平放置培養(yǎng)瓶，旋轉震蕩培養(yǎng)瓶，使細胞均勻分部在培養(yǎng)平面上，然后將培養(yǎng)瓶置于CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
六、 凍存操作步驟：
1.將需要那凍存的細胞從CO2培養(yǎng)箱中取出，在生物安全柜內，打開培養(yǎng)瓶瓶口，吸棄瓶內的培養(yǎng)基；
2.向培養(yǎng)內加入無菌1×PBS 3ml，之后水平放置培養(yǎng)瓶，旋轉震蕩培養(yǎng)瓶，使PBS能夠浸潤到培養(yǎng)平面上所都的面積，吸棄PBS；
3.重復步驟2一次，之后向瓶內加入消化液1ml，輕微震蕩后放入37℃CO2培養(yǎng)箱中孵育2-4min；
4.孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，如還有部分細胞為消化下來，可在生物安全柜內用移液管吸起消化液，吹打培養(yǎng)平面；
5.向消化下細胞的培養(yǎng)瓶中加入1ml含血清的完全培養(yǎng)基終止消化，然后將培養(yǎng)瓶中的液體轉入15ml離心管中，300g離心5min；
6.離心完成后，棄上清，用0.5mlFBS重懸細胞，再加入0.5ml凍存液，用移液管充分混勻，之后轉入1.8ml凍存管中；
7.將凍存管轉入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉入-80℃冰箱中過夜降溫；
8.第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉入液氮罐中保存。
