版本：A4修改日期：2022.02.25
茶多酚(TP)檢測(cè)試劑盒(福林酚微板法)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
茶多酚(Tea Polyphenols，TP)是茶葉中多酚類物質(zhì)的總稱，包括黃烷醇類、花色苷類、黃酮類、黃酮醇類和酚酸類等，是一類兒茶素為主體的黃酮化合物，兒茶素占 60~80%，具有 C6-C3-C6 碳骨架結(jié)構(gòu)，是一種重要的天然抗氧化物質(zhì)，能夠清除自由基。類物質(zhì)茶多酚又稱茶鞣或茶單寧，是形成茶葉色香味的主要成份之一，也是茶葉中有保健功能的主要成份之一，研究表明茶多酚等活性物質(zhì)具解毒和抗輻射作用，能有效地阻止放射性物質(zhì)侵入骨髓，并可使鍶 90 和鈷 60 迅速排出體外。
茶多酚(TP)檢測(cè)試劑盒(福林酚微板法)參考國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 8313 而來(lái)，其檢測(cè)原理是利用福林酚氧化茶多酚中的酚羥基-OH，使其顯藍(lán)色，用分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀測(cè)定 765nm(或 600nm)處吸光度，在一定范圍內(nèi)吸光度與顏色深淺的變
化成正比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，進(jìn)而計(jì)算出茶多酚的含量，主要用于測(cè)定植物組織樣品中茶多酚含量，尤其適用于茶葉。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成：
| 編號(hào) 名稱 | TO1205 100T | Storage |
| 試劑(A): 茶多酚標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml) | 1ml | 4℃ 避光 |
| 試劑(B): 福林酚試劑 | 1.5ml | 4℃ 避光 |
| 試劑(C): TP 顯色液 | 10ml | 4℃ |
| 使用說(shuō)明書 | 1 份 | |
自備材料：
1、茶葉、綠茶等待測(cè)樣本、蒸餾水、甲醇
2、研缽、200 目細(xì)胞篩、水浴鍋或電爐
3、離心機(jī)、離心管或試管、96 孔板、酶標(biāo)儀水浴鍋或電爐
操作步驟(僅供參考)：
1、準(zhǔn)備樣品：
①固體樣品：稱取 1g 植物樣品，充分研磨成粉末，稱取 0.2g 加入 10ml 離心管中，再向其中加入在 70℃水浴中預(yù)熱的 70%甲醇水溶液 5ml，蓋緊并使樣品濕潤(rùn)，立即放入 70℃水浴中浸提 10min（每隔 5min 晃動(dòng) 1 次），浸提后冷卻至室溫，3500r/min 離心
10min，轉(zhuǎn)移上清液至 10ml 容量瓶，向樣品殘渣再加入 5ml 70%甲醇水溶液浸提一次，重復(fù)上述操作；合并上清液并定容至 10ml，搖勻，即為茶多酚提取液；4℃避光保存，用于茶多酚的檢測(cè)。
②綠茶、血漿、血清和尿液等液體樣品：綠茶樣品可直接用該試劑盒測(cè)定；血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可直接用本試劑盒測(cè)定。
2、配制系列茶多酚標(biāo)準(zhǔn)：用蒸餾水和茶多酚標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)，按下表進(jìn)行操作，依次稀釋。
| 加入物(μl) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
| 茶多酚標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml) | 5 | 10 | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 |
| 蒸餾水 | 995 | 990 | 980 | 960 | 940 | 920 | 900 |
| 相當(dāng)于茶多酚含量(μg/ml) | 5 | 10 | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 |
3、配制福林酚工作液：按照福林酚試劑：蒸餾水=1：9 的比例，現(xiàn)配現(xiàn)用，不宜長(zhǎng)期保存。
4、TP 加樣：取 96 孔板，按照下表設(shè)置空白孔、對(duì)照孔、測(cè)定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡；如果樣品中的 TP 濃度過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置 2 平行孔，求平均值。
| 加入物(μl) | 空白孔 | 標(biāo)準(zhǔn)孔 | 測(cè)定孔 |
| 蒸餾水 | 25 | － | － |
| 系列茶多酚標(biāo)準(zhǔn)(1~7 號(hào)) | － | 25 | － |
| 待測(cè)樣品 | － | － | 25 |
| 福林酚工作液 | 125 | 125 | 125 |
| 搖勻，反應(yīng)5~8min。加入100μl TP 顯色液，搖勻，室溫下放置60min。 | |||
5、TP 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，酶標(biāo)儀測(cè)定 765nm(或 600nm)處各標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)定孔的吸光度。
計(jì)算：
以系列茶多酚標(biāo)準(zhǔn)濃度(1~7 號(hào))(5、10、20、40、60、80、100μg/ml)為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程；以測(cè)定管吸光度代入回歸方程求得提取液中 TP 含量。
固體樣品 TP 含量(μg/g)= (C×VT×N)/W
式中：C=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得提取液中茶多酚含量(μg/ml) VT=提取液的總體積(ml) =10ml
W=固體樣品的質(zhì)量(g) =0.2g N=提取液的稀釋倍數(shù)
液體樣本 TP 含量(μg/ml)= C×N
式中：C=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得提取液中茶多酚含量(μg/ml)
N=提取液的稀釋倍數(shù)
注意事項(xiàng)：
1、茶多酚提取液宜 4℃避光保存，且保存時(shí)間在 24h 以內(nèi)。
2、福林酚有一定的腐蝕性，請(qǐng)小心操作。
3、樣品中茶多酚濃度過(guò)高，顏色反應(yīng)將特別深，超出儀器的檢測(cè)范圍，應(yīng)用蒸餾水適當(dāng)稀釋重新檢測(cè)。
4、該試劑盒測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，肉眼可見，濃度小于 10μg/ml 時(shí)呈淺藍(lán)色，20~60μg/ml 時(shí)呈藍(lán)色，大于 80μg/ml 時(shí)呈深藍(lán)色。
附錄：參考標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍： 測(cè)定茶多酚標(biāo)準(zhǔn)在 5、10、20、40、60、80、100 μg/ml 時(shí)的吸光度，據(jù)此作出其參考標(biāo)準(zhǔn)曲線如下：
注意：由于檢測(cè)儀器和操作手法等條件的不同，參考值范圍會(huì)有波動(dòng)，該值僅供參考。
有效期：6 個(gè)月有效；4℃運(yùn)輸，4℃保存。
