柱式血清血漿游離RNA提取試劑盒(柱式血清血漿游離RNAout)是專門用于從血清/血漿等液體樣品中提取游離 RNA 的產(chǎn)品,
它具有下列特點(diǎn):
1. 操作簡(jiǎn)單,整個(gè)過程只需要 20 分鐘左右,不需要額外在洗柱液中補(bǔ)加乙醇。
2. 靈敏度高,通過 RT-PCR 檢測(cè)到的最終靈敏度可以達(dá)到 50 拷貝/mL。
3. 安全無毒,不需要使用苯酚和氯仿等有機(jī)溶液。
4. 與 RT-PCR 和熒光 RT-PCR 兼容。
5. 價(jià)廉物美,性價(jià)比遠(yuǎn)低于國外同類產(chǎn)品。
6. 適用于各種材料,包括血清、血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養(yǎng)細(xì)胞上清液等無細(xì)胞材料。
成份 編號(hào) 大紙盒包裝 柱式血清血漿 RNAout 溶液 A 130978A 30 mL 離心吸附柱(小提) 60911 50 套 通用洗柱液 60408 50 mL RNA 洗脫液 71207 10 mL 使用手冊(cè) 1 份
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸,4℃保存,有效期一年。
1. 在 1.5 mL 離心管中加入 0.1-0.2 mL 血清/血漿樣品。如果樣品需要富 集,可以將 1.5 mL 液體在 4℃下 24,000 g 冷凍離心 60 分鐘,移棄1.3 mL 后繼續(xù)操作。
2. 加入 0.6 mL 溶液 A,振蕩 30 秒混勻后室溫放置 10 分鐘。注意:溶液A在 4℃放置后可能會(huì)產(chǎn)生沉淀,使用前必須放在 65℃水浴使沉淀徹底溶解并 充分搖勻后再取用。
3. 將溶液全部轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,室溫放置 2 分鐘。
4. 12,000-15,000 g 室溫離心 1 分鐘,棄收集管中穿透液。
5. 加入 0.8 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中,12,000-15,000 g 室溫離 心 1 分鐘,棄收集管中穿透液。
6. 12,000-15,000 g 室溫離心半分鐘。
7. 在離心吸附柱的濾膜的中部加入 30-100 uL 通用洗脫液,然后將離心吸 附柱套入一新的 1.5 mL 離心管中,室溫放置 2 分鐘。
8. 12,000-15,000 g 室溫離心 1 分鐘,離心管中收集的樣品即為 RNA。
9. RNA 樣品可以直接用于 RT-PCR 或逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),也可放-80℃長期保存。 注:游離的 RNA 一般含量極少,不宜用電泳法檢測(cè)。
Q:提取血清血漿等液體樣品/病毒核酸(RNA 或 DNA)為何很難?
A:原因一是量少。病毒顆粒中的 RNA 或 DNA 是作為遺傳物質(zhì)保存,每個(gè)病 毒最多只攜帶幾個(gè)拷貝(而一個(gè)細(xì)胞中有上萬種 RNA 分子,每種 RNA 有很 多拷貝),同時(shí)其長度也十分有限(一般不到細(xì)胞基因組的萬分之一),樣品 中病毒數(shù)往往又不是很多,使得樣品中病毒核酸的絕對(duì)量往往比一個(gè)細(xì)胞 中核酸的絕對(duì)量還少,所以操作中十分容易丟失。
另外,由于得到的核酸 絕對(duì)量很少,不能使用電泳和測(cè) OD 檢測(cè),只能通過 PCR 或 RT-PCR 檢 測(cè),而 PCR 或 RT-PCR 的條件又需要優(yōu)化,所以要確定提取是否成功十 分不容易。