產(chǎn)品描述:
羥基茶酚藍(lán)(HNB)指示染料,可與Mg2+形成復(fù)合物,為紫羅蘭色。在 LAMP反應(yīng)中由于大量焦磷酸鹽的形成,焦磷酸鹽將螯合掉Ma2+。使得HNB的顏色變?yōu)樘焖{(lán)色,因此該試劑可作為LAMP反應(yīng)的指示染料,陽性擴(kuò)增樣品為天藍(lán)色,而陰性仍然保持紫羅蘭色。HNB變色染料可與UDG LAMP防污染擴(kuò)增試劑盒搭配使用從而建立可視化檢測方法
使用方法:
1.該制品為凍干品形式,首次使用前使用0.2ml ddH2O溶解后使用,溶解后使用為50×濃度。溶解前可保存于室溫,溶解后制品要保存在-20℃以下。
2.參考UDG LAMP防污染擴(kuò)增試劑盒配制反應(yīng)體系在0.2ml EP反應(yīng)管中加入下述試劑:
10xIsothermo Buffer(Mg2+ free) 2μl
Bst6.0 DNA/RNA Polymerase(8U/μl) 0.5~1μl
10mM dUTP Mixture 1.6μl
溶解后的HNB染料(50x) 0.4μl
100mM Mg2+ 1.2μl
LAMP Primer Mix 1-2μl
模板DNA or RNA 1μl
ddH2O到總體積 20μl
3. 反應(yīng)體系配好后,置于60~65℃(首次實(shí)驗(yàn)采用60℃)進(jìn)行反應(yīng)30~60min。
存儲:RT
注意事項:
HNB搭配的最佳Mg2+濃度為6mM,即20μl 反應(yīng)體系中加入1.2μl 的Mg2+(10mM)。