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Equi-phi29 DNA聚合酶

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Equi-phi29 DNA Polymerase是phi29的改造體,并經(jīng)多次純化分離而得。在保留了phi29 DNA聚合酶的鏈置換、連續(xù)合成特性(>70kb)的基礎(chǔ)上,提高了滾環(huán)擴增的反應(yīng)溫度,該酶酶可以在42℃條件下持續(xù)的進行DNA合成(而phi29 DNA 聚合酶在此溫度下反應(yīng)活性很低)。
這種高溫的反應(yīng)特性,在以下幾個方面對實驗有明顯的提升:

(1)在NGS測序中,其提升了高GC含量、回文結(jié)構(gòu)等復(fù)雜模板的延伸能力,使得NGS的覆蓋度更均一,降低測序所需深度;

(2)高溫的反應(yīng)條件,提升了基因組DNA的WGA產(chǎn)物的合成量,并可以進行變溫擴增;

(3)降低測序中Gap區(qū)域,提升單細胞測序的數(shù)據(jù)質(zhì)量和完整度;

(4)降低非特異性擴增產(chǎn)物;

(5)提升MDA/RCA等實驗的擴增性能和特異性。
此外,Equi-phi29 DNA Polymerase仍然具有很強的3’-5’外切酶校讀功能,合成的DNA片段保真性高。該酶的外切酶活性較強,因此合成過程中引物需要3’端硫代修飾,以降低外切活性對引物的切割效應(yīng)。

主要特征

  • 超強鏈置換能力
  • 連續(xù)合成能力
  • 擴增的高保真性

應(yīng)用

  • DNA恒溫滾環(huán)擴增
  • 需強鏈置換和DNA連續(xù)合成的反應(yīng)
  • 質(zhì)粒快速復(fù)制
  • 高保真快速復(fù)制

儲存

-20℃可保存3年。

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