注 意： 正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
尿素是生物體內(nèi)含氮化合物分解的終產(chǎn)物，在尿酶催化下分解轉(zhuǎn)化成氨。血液尿素氮是腎功能的主要指標(biāo)之一。
測(cè)定原理：
樣本中尿素氮在氯化高鐵一磷酸溶液中與二乙酰一肟和硫胺脲共煮，生成一種紅色的二嗪化合物，其顏色的深淺與尿素氮含量成正比，采用二乙酰一肟法測(cè)定尿素氮含量。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、研缽、常溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制：
試劑一：液體6mL×1瓶，4℃避光保存，
試劑二：液體60mL×1瓶，4℃避光保存。
樣品處理：
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，勻漿后于25℃，10000g離心10min，取上清待測(cè)。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：蒸餾水體積（mL ）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL蒸餾水），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清或其它液體：直接檢測(cè)。
測(cè)定操作：
|
| 空白管 | 測(cè)定管 |
| 樣品（μL） |
| 40 |
| H2O（μL） | 40 |
|
| 試劑一（μL） | 100 | 100 |
| 試劑二（mL） | 1000 | 1000 |
混勻，沸水浴10min，冷卻后，540nm下測(cè)定吸光值。△A=A測(cè)定-A空白。空白管只要做一管。
尿素氮含量計(jì)算：
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y =2.048x + 0.0229，R2 = 0.9943；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。
1、按照血清（漿）或者細(xì)胞培養(yǎng)液體積計(jì)算
尿素氮含量(mg/mL)= (△A-0.0229)÷2.048=0.4882×(△A-0.0229)
2、按照樣本質(zhì)量計(jì)算
尿素氮含量mg/g鮮重)= (△A-0.0229)÷2.048×V樣總÷W=0.4882×(△A-0.0229)÷W
3、按照蛋白濃度計(jì)算
尿素氮含量(mg/mg prot)= (△A-0.0229)÷2.048÷Cpr=0.4882×(△A-0.0229) ÷Cpr
V樣總：加入提取液體積，1 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。
