測定意義
亞硝酸鹽廣泛存在于水體和土壤中,不僅是有機氮分解的重要中間產(chǎn)物,也可能來自污染。人體攝入過量后,可誘發(fā)消化系統(tǒng)癌變。
測定原理
在酸性條件下,亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸反應(yīng)生成重氮化合物,再與N-1-萘基乙二胺形成紫紅色偶氮化合物,在540nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、酶標(biāo)儀、96孔酶標(biāo)板,蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,室溫保存。
試劑一:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。
樣品處理
1. 土壤樣品:準(zhǔn)確稱取過篩后的土壤越0.5g,加入0.5mL 提取液,室溫震蕩1h,8000rpm,25℃離心15min,靜置,待其分層后,取上清液待測。
2. 水樣:直接檢測;如果渾濁,可以離心后再測定。
測定步驟和操作表
| 空白管 | 測定管 |
樣品(mL) |
| 0.05 |
試劑一(mL) | 0.1 | 0.1 |
試劑二(mL) | 0.1 | 0.1 |
H2O | 0.05 |
|
混勻,室溫靜置15min,以空白管調(diào)零,測定A540 |
亞硝酸鹽含量計算
標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:y= 0.011x + 0.0216,R2= 0. 9991
(1)土壤樣品:NO2-(μmoL/g)=×(A540測定管 - 0.0216)×0.5÷樣品質(zhì)量
(2)水樣:NO2-(μmoL /mL)=×(A540測定管 - 0.0216)
注意事項
1. 試劑盒2-8℃保存。
2. 本測定對于溫度沒有特別要求。
3. 試劑對人體有一定的危害,請穿實驗服,戴手套操作。