注 意:正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
類胡蘿卜素是一種脂溶性且具有營養(yǎng)特性的化合物,給植物和動物提供天然色素,是重要的抗氧化劑,并有能力轉(zhuǎn)換為必需維生素。類胡蘿卜素可預(yù)防細(xì)胞,組織和基因損毀,增強(qiáng)身體免疫系統(tǒng),抵御感染,減少癌癥風(fēng)險(xiǎn),保護(hù)心臟。
原理:
樣品通過混合有機(jī)溶劑萃取,類胡蘿卜素與非類胡蘿卜素成分分離,在440nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、烘箱,100目篩、三角瓶或燒杯、漏斗,紗布、玻璃試管、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、丙酮。
試劑組成和配制:
試劑一:液體2L,4℃保存。
試劑二:丙酮(自備)1L,4℃保存。
提取液:臨用前可按照試劑一(V):試劑二(V)= 2:1混勻,封口膜封緊,防止揮發(fā),配置好的提取液4℃保存。
樣本處理:
組織樣品:60℃烘干粉碎,過 100 目篩,稱約 0.2g 于玻璃試管中,加 6mL 提取液,浸提 20min,提取液過濾至燒杯或三角瓶中,反復(fù)提取至殘?jiān)鼰o色,合并濾液定容至 50mL 待測。
測定操作表:
| 空白管 | 測定管 |
樣本(μL) |
| 1000 |
提取液(μL) | 1000 |
|
于微量石英比色皿/96 孔板,迅速測定440nm處吸光值A(chǔ),分別記為A空白管和A測定管,△A=A測定管-A空白管 |
注意:空白管只需測定一次。
計(jì)算公式
a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
類胡蘿卜素含量(μg/g)= △A×V 樣總÷(ε×d)÷W×1000
= 20×△A÷W
V 樣總:提取液總體積,50mL;ε:類胡蘿卜素經(jīng)驗(yàn)吸光系數(shù),2500;d:比色皿光徑,1cm;W:樣本質(zhì)量,g
b. 用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下
類胡蘿卜素含量(μg/g)= △A×V 樣總÷(ε×d)÷W×1000
= 40×△A÷W
V 樣總:提取液總體積,50mL;ε:類胡蘿卜素經(jīng)驗(yàn)吸光系數(shù),2500;d:96 孔板光徑,0.5cm;W:樣本質(zhì)量,g
注意事項(xiàng)
1. 提取液易揮發(fā),有毒性,操作時(shí)做好防護(hù)措施。
2. 測定必須能迅速,防止揮發(fā)造成誤差