RAPA HiFi DNA聚合酶

英文名稱：RAPA HiFi DNA
產(chǎn)品編號(hào)：A3201
產(chǎn)品類別：核酸擴(kuò)增/純化
檢測(cè)方法：PCR
檢測(cè)樣本：DNA
存儲(chǔ)條件：-20℃
保質(zhì)期：2年

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500U

￥ 1800 1

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RAPA HiFi DNA聚合酶，其來源于高保真DNA聚合酶，并加入了增強(qiáng)的延伸結(jié)構(gòu)，使其具有超保真性能（~280倍Taq）、長(zhǎng)片段擴(kuò)增能力、高產(chǎn)量。長(zhǎng)片段擴(kuò)增能力，使用該酶可輕松擴(kuò)增8kb的基因組DNA、20kb的λDNA、8kb的cDNA。該酶具有6kb/min以上的延伸速度。該酶具有5’-3’的聚合酶活性、強(qiáng)3’-5’的外切酶活性，產(chǎn)物為平末端。

主要特征

超保真擴(kuò)增：~280倍Taq的保真性能，是載體構(gòu)建、點(diǎn)突變、NGS模板擴(kuò)增、基因合成的最佳用酶。
快速擴(kuò)增：具有6kb/min的擴(kuò)增能力。
長(zhǎng)片段擴(kuò)增：質(zhì)粒、λDNA 等簡(jiǎn)單模板可以有效擴(kuò)增>20 kb，基因組可以有效擴(kuò)增>8 kb，cDNA可以有效擴(kuò)增>8kb。

組分

組分名稱	500U
RAPA HiFi DNA Polymerase(5 U/μl)	100 μl
2xRAPA HiFi Buffer	1 ml×5

單位定義

一個(gè)活力單位即在在74°C條件下，30分鐘內(nèi)催化10 nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量。

儲(chǔ)存

長(zhǎng)期儲(chǔ)存置于-20°C以下，可保存2年；短期使用置于4°C（3個(gè)月）保存。

使用方法

1.按下表配制反應(yīng)體系并混合均勻：
2xRAPA HiFi Buffer 12.5 μl
RAPA HiFi DNA Polymerase(5 U/μl) 0.25 μl
dNTP Mixture (10 mM each) 0.25 μl
上游引物(10 μM) 1 μl
下游引物(10 μM) 1 μl
*模板DNA 1-250 ng
ddH₂O up to 25 μl

*模板DNA用量參數(shù)(25 μl反應(yīng)體系,目的片段≤20kb)
     5-250 ng Genomic DNA
     0.1-10 ng Plasmid DNA
     1-2 μl cDNA from RT reaction

2. PCR擴(kuò)增循環(huán)參數(shù)

（1）擴(kuò)增片段<5kb時(shí)采用如下程序

循環(huán)數(shù)	溫度	時(shí)間
1st Cycle	95°C	1min
25-35 Cyclese	95°C	30s
	50~60°C	30s
	72°C	6kb/min
Last Cycle	72°C	2min

（2）擴(kuò)增片段>5kb時(shí)采用如下程序

循環(huán)數(shù)	溫度	時(shí)間
1st Cycle	95°C	1min
25-35 Cyclese	95°C	30s
	50~60°C	30s
	72°C	2-3kb/min
Last Cycle	72°C	2min

3.注意事項(xiàng)

（1）當(dāng)模板GC含量>65%時(shí)，請(qǐng)?zhí)砑?×Q-Solution（Cat. No.: A3002）。
（2）當(dāng)擴(kuò)增片段<1kb時(shí)，延伸時(shí)間可直接使用15s，當(dāng)擴(kuò)增片段>5 kb時(shí)，按照2-3 kb/min的延伸時(shí)間進(jìn)行設(shè)置，能獲得更高的產(chǎn)量。
（3）由于不同的PCR管其導(dǎo)熱性能有所不同，通常PCR采用25 μl體系可以獲得更高的產(chǎn)量。