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Klenow Fragment(exo-)

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Klenow片段(3´→5´ exo-)是DNA聚合酶I的N末端截短物,它保留了DNA聚合酶活性,但5´-3´ 核酸外切酶活性缺失。該酶進(jìn)一步經(jīng)點突變(D355A,E357A)去除了其 3´-5´的核酸外切酶活性。因此該DNA聚合酶無任何外切酶活性,僅包含了DNA聚合酶活性,廣泛用于標(biāo)記探針制備、cDNA 第二條鏈的合成等建庫試驗。

包裝

組分名稱 數(shù)量
Klenow Fragment(exo-) (10 U/μl) 100 μl
*10×Klenow Buffer 1 ml
*10×Klenow Buffer: 500 mM Tris-HCl (pH 8.0 at 25 °C), 50 mM MgCl2, 10 mM DTT. 該酶兼容PCR Buffer和內(nèi)切酶Buffer。

單位定義

一個活力單位即在37°C條件下,30分鐘內(nèi)催化10 nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量。

應(yīng)用

  • 用隨機(jī)引物制備探針
  • 隨機(jī)引物法標(biāo)記
  • cDNA 第二條鏈的合成
  • 該酶不能用于產(chǎn)物平端不齊

儲存

-20°C可保存3年。

失活

75°C,20min失活。
 
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