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T7 核酸內(nèi)切酶I

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T7 核酸內(nèi)切酶I識(shí)別并切割不完全配對(duì) DNA、十字型結(jié)構(gòu) DNA、Holliday 結(jié)構(gòu)或交叉 DNA、異源雙鏈 DNA 或者以更慢的速度切割含切刻的雙鏈 DNA。T7核酸內(nèi)切酶I切割錯(cuò)配堿基 5´ 端的第一、第二或第三個(gè)磷酸二酯。本產(chǎn)品是通過克隆重組表達(dá)T7核酸內(nèi)切酶I基因，獲得的高純度蛋白，該酶無其他內(nèi)切酶或外切酶污染。

組分
名稱 數(shù)量
T7 Endonuclease I (10 U/μl) 25 μl/250 μl
10X T7 Endonuclease I Buffer 1 ml/1 mlx5

單位定義
在 50 μl 反應(yīng)體系，37℃ 條件下，1 小時(shí)將 90% 以上的 1 μg 超螺旋十字型結(jié)構(gòu)的 pUC（AT）* 轉(zhuǎn)化成 90% 以上的線性結(jié)構(gòu)所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位。

應(yīng)用
  • 基因突變、SNP、TALEN或CRISPR/Cas9形成的突變體檢測
  • 識(shí)別錯(cuò)配 DNA
  • 分解四方向交叉 DNA 或分支 DNA
  • 檢測或切割異源二聚體 DNA 和切刻 DNA
  • 隨機(jī)切割線性 DNA 進(jìn)行 shot-gun 克隆

1X T7 Endonuclease I Buffer
50 mM NaCl，10 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2 ，1 mM DTT（pH 7.9 @ 25℃）。

酶保存液
50 mM Tris-HCl, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol, pH 7.5。

儲(chǔ)存
置于-20°C，可保存2年，避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)
(1) T7 核酸內(nèi)切酶 I 是一種具有底物結(jié)構(gòu)選擇性的酶；該酶以不同的活性作用于不同的 DNA 底物。切割特定底物，必須控制酶量和反應(yīng)時(shí)間。
(2)反應(yīng)溫度超過42℃時(shí)，會(huì)增加非特異性核酸酶活性。
 
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