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甲酰胺嘧啶-DNA糖基化酶（Fpg）

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Fpg?(formamidopyrimidine [fapy]-DNA glycosylase，甲酰胺嘧啶 [fapy]-DNA 糖基化酶）也稱作 8-氧代鳥嘌呤 DNA 糖基化酶，既有 N-端糖基化酶活性也有 AP-裂解酶活性。N-端糖基化酶活性可以切下雙鏈 DNA 上受損的嘌呤堿基，產(chǎn)生一個(gè)脫嘌呤（AP）位點(diǎn)。AP-裂解酶活性可以切割 AP 位點(diǎn)的 3? 或 5? 端，因此可以除去 AP 位點(diǎn)，產(chǎn)生一個(gè)具有 3? 和 5? 磷酸的堿基缺口。被 Fpg 識(shí)別并切除的受損堿基包括：7,8-二羥基-8-氧代鳥嘌呤（8-氧代鳥嘌呤）、8-羥基腺嘌呤、fapy-鳥嘌呤、甲基-fapy-鳥嘌呤、fapy-腺嘌呤、黃曲霉毒素 B1-fapy-鳥嘌呤、5-羥基-胞嘧啶和 5-羥基尿嘧啶。

組分
名稱 數(shù)量
Fpg (8 U/μl) 100 μl/500 μl
10X Fpg Reaction Buffer 1 ml/1 ml×2

應(yīng)用
  • 單細(xì)胞凝膠電泳
  • DNA損傷和修復(fù)研究
  • SNP分析

單位定義
1 單位指在 10 μl 反應(yīng)體系中，37℃條件下， 1 小時(shí)內(nèi)能夠切割 1 pmol 含單個(gè)與胞嘧啶配對(duì)的 8-氧代鳥嘌呤的 34 bp 寡核苷酸雙鏈所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位。

反應(yīng)條件
10 mM Bis-Tris（pH 7.0），10 mM MgCl2 ，1mM DTT, 100 μg/ml BSA，37℃ 溫育

酶儲(chǔ)存液
50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 50% Glycerol.

熱失活
60°C 10min。

儲(chǔ)存
置于-20°C可保存2年，避免反復(fù)凍融。
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